[发明专利]一种普鲁兰酶突变体

权利要求书

1.一种普鲁兰酶突变体，其特征在于，所述突变体是在SEQ ID NO.2所示的野生型普鲁兰酶氨基酸序列的基础上发生以下突变中的任意一种获得的：

N467G+N492A+N709R、N467G+N492A+S731C、N467G+N492A+N709R+T730S、N467G+N492A+N709R+A591S+G723S、N467G+N492A、N467G+N492A+G723S。

2.权利要求1所述突变体的编码基因。

3.包含权利要求2所述编码基因的重组载体或重组菌株。

4.如权利要求3所述的重组载体或重组菌株，其特征在于，所述重组载体采用的表达载体包括但不限于pHY-WZX，pHY300plk，pUB110，pE194，pHT1469质粒；所述重组菌株采用的宿主细胞包括但不限于大肠杆菌、枯草杆菌、地衣芽胞杆菌、短小芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌、酿酒酵母、毕赤氏酵母、黑曲霉、米曲霉或瑞氏木霉。

5.权利要求1所述突变体在淀粉水解中的应用。

6.权利要求3所述重组载体或重组菌株在生产普鲁兰酶突变体中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，发酵生产普鲁兰酶突变体的方法如下：

将重组菌株按接种量为5%-10%接入发酵罐；发酵过程中采用发酵温度33~45℃，控制溶氧为0.1%~20%，pH 为6.0~7.8，流加30%~60%麦芽糖浆并维持还原糖含量在0.1%-5%；发酵持续到90-120 h，发酵过程定时取样分析，发酵终点控制为发酵4小时内酶活增加值小于5-25U/h。