[发明专利]一种微凝胶检测探针、试剂盒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种微凝胶检测探针的制备方法，其特征在于：该微凝胶检测探针是通过溶胀-收缩的方法将量子点或金纳米粒子包埋在聚(N-异丙基丙烯酰胺)-丙烯酸共聚物微凝胶(pNIPAM-co-AA)中。

2.根据权利要求1所述的微凝胶检测探针的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：首先将干燥的微凝胶聚合物(pNIPAM-co-AA)溶解为水溶液，取水溶性量子点或金纳米粒子与微凝胶溶液混合，将混合液在低于微凝胶相转变温度(32℃)的条件下超声，然后置于高于或等于相转变温度的金属浴中加热，再超声-加热，如此循环3-10次，即得；将包埋水溶性量子点的产物标记为QDs/pNIPAM-co-AA，将包埋金纳米粒子的产物标记为Au/pNIPAM-co-AA。

3.根据权利要求1所述的微凝胶检测探针的制备方法，其特征在于：使用水溶性量子点(QDs)，例如水溶性CdSe/ZnS核壳量子点，5mg/mL；或者使用水溶性的光学纳米颗粒材料，例如使用尺寸为13nm柠檬酸保护的金纳米颗粒，浓度为100-500nM。

4.根据权利要求3所述的微凝胶检测探针的制备方法，其特征在于：所述微凝胶聚合物溶液的浓度为0.05-5.0mg/mL；各物质的用量比为：水溶性量子点或金纳米颗粒溶液：微凝胶溶液体积比为1:10。

5.根据权利要求1所述的微凝胶检测探针的制备方法，其特征在于：将N-异丙基丙烯酰胺单体，十二烷基硫酸钠，亚甲基双丙烯酰胺和丙烯酸单体混合溶解在超纯水中，并用氩气脱气30分钟，将反应容器密封并加热至70℃，然后将过硫酸铵溶液注入烧瓶中以引发聚合，4小时之后终止聚合，并将微凝胶溶液离心洗涤干燥后即得，产物标记为pNIPAM-co-AA；其中各物质的用量比为：N-异丙基丙烯酰胺单体：十二烷基硫酸钠：亚甲基双丙烯酰胺：丙烯酸单体：超纯水：过硫酸铵溶液为：0.5g：0.017g：0.015g：35μL：30mL：1mL；过硫酸铵溶液的浓度为12mg/mL。

6.权利要求1-5任一项所述方法制备得到的微凝胶检测探针。

7.权利要求6所述微凝胶检测探针在制备免疫层析法检测体系中的应用。

8.一种试剂盒，包括权利要求6所述微凝胶检测探针。

9.一种利用权利要求6所述的微凝胶检测探针制备的用于检测C-反应蛋白的试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括

1)、偶联CRP抗体的QDs/pNIPAM-co-AA微凝胶检测探针；

或者是偶联CRP抗体的Au/pNIPAM-co-AA微凝胶检测探针；

2)、C-反应蛋白免疫层析试纸条，该试纸条包括：底板，样品垫，硝酸纤维素膜，吸水纸，样片垫，硝酸纤维素膜和吸水纸依次粘贴固定在底板上；样品垫，吸水纸与硝酸纤维素膜相接处各交叠2mm，在检测线(T线)固定有CRP包被抗体，控制线(C线)上则包被了羊抗兔IgG。

10.一种利用权利要求6所述的微凝胶检测探针制备的用于检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)抗体IgG试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括

1)、偶联羊抗人IgG抗体的QDs/pNIPAM-co-AA微凝胶检测探针；

2)、SARS-CoV-2抗体IgG免疫层析试纸条，该试纸条包括：底板，样品垫，硝酸纤维素膜，吸水纸，样片垫，硝酸纤维素膜和吸水纸依次粘贴固定在底板上；样品垫，吸水纸与硝酸纤维素膜相接处各交叠2mm，T线上固定的是新型冠状病毒(SARS-CoV-2)产生的S-蛋白，C线上固定的是兔抗羊IgG抗体。