[发明专利]一种检测重组组合抗体含量比例、电荷异质性和/或等电点的方法

权利要求书

1.检测重组组合抗体(MabPair)的含量比例、电荷异质性和/或等电点的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取重组组合抗体作为供试品；

2)使用供试品配制用于全柱成像毛细管等电聚焦(iCIEF)检测的分析样品混合液，通过iCIEF系统进行检测，实时采集等电聚焦图谱；

3)根据步骤2)中的等电聚焦图谱，计算待分析重组组合抗体中单抗的含量比例、电荷异质性和/或等电点。

2.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1)中的重组组合抗体是由同一细胞株采用同一生产工艺生产，含有预定比例含量的两种单抗组合产物；优选地，所述分析样品混合液中组合抗体的蛋白终浓度为0.1-1mg/ml。

3.如权利要求1或2所述方法，其特征在于，在步骤1)中，若重组组合抗体样品处理后所含盐浓度15mM，则进行超滤浓缩脱盐处理后作为供试品。

4.如权利要求1或2所述方法，其特征在于，在步骤2)中，所述分析样品混合液包含供试品、载体两性电解质和凝胶载体基质；优选地，所述分析样品混合液还包含助溶剂和/或等电点标记物。

5.如权利要求4所述方法，其特征在于，步骤2)中的载体两性电解质由一种或两种以上两性电解质组成，优选由两种两性电解质组成；更优选地，所述载体两性电解质由比例25％-75％的pH 3-10和比例75％-25％的pH 8-10.5两性电解质组成；更优选地，所述载体两性电解质在分析样品混合液中的体积含量为2％-5％。

6.如权利要求4所述方法，其特征在于，步骤2)中的凝胶载体基质为甲基纤维素(MC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)或葡聚糖中的一种或更多种，优选为羟丙基甲基纤维素；更优选地，所述凝胶载体基质在分析样品混合液中的体积含量为2.5％-4.5％。

7.如权利要求4所述方法，其特征在于，步骤2)中的助溶剂是尿素、甲酰胺、甘油、山梨醇、丙二醇、两性离子和中性表面活性剂中的一种或多种，优选为尿素；更优选地，所述助溶剂在分析样品混合液中的终浓度为0.5-4mol/L。

8.如权利要求4所述方法，其特征在于，步骤2)中的等电点标记物是已知pI的化学或多肽类小分子等电点标记物，优选范围为pI 4.0至pI 10.0；更优选pI 6.14和pI 6.61中的一种与pI 9.46和pI 9.77中的一种组合使用；若采用荧光检测模式，将所述pI 9.46替换为pI9.50。

9.如权利要求1或2所述方法，其特征在于，在步骤2)中，所述分析样品混合液上样于等电聚焦毛细管中；优选地，所述等电聚焦毛细管为FC内涂层、内径100μm、有效分离长度5cm的卡盒或毛细管柱。

10.如权利要求1或2所述方法，其特征在于，步骤2)中的毛细管温度为10-30℃；任选地，所采用的聚焦电压和时间为1.5kV维持1min然后3kV维持5-11min；任选地，图谱检测采用紫外吸收检测器或荧光检测器，优选地，光源为氘灯或者LED。