[发明专利]一种快速筛选双孢蘑菇W192菌株的耐高温菌株的引物及方法

说明书

一种快速筛选双孢蘑菇W192菌株的耐高温菌株的引物及方法，所述引物的序列为：4140‑1F:TTCCGTTCAGTGCTACC；4140‑1R:TGCAAAGAGAGCTGGTACA。本发明可以快速筛选双孢蘑菇W192菌株的耐高温菌株，在为进行出菇实验可以提前预判W192孢子菌株的耐高温特性，大大地节约了选育耐高温菌株的时间和促进的选育的进程。

技术领域

本发明属于食用菌育种技术领域，涉及一种快速筛选双孢蘑菇W192菌株的耐高温菌株的引物及方法。

背景技术

双孢蘑菇(Agaricusbisporus)，中文别名为蘑菇、洋蘑菇、白蘑菇。其含有丰富的蛋白质、多糖、维生素、核苷酸和不饱和脂肪酸，不仅营养丰富，肉质肥美，味道鲜美，而且热能低，具有很高的医疗保健作用，日益受到各国人民的喜爱。在国外，双孢蘑菇至今仍占食用菌消费的主导地位，以世界食用菌生产第二大国-美国(约占世界总产量16％)为例，双孢蘑菇占其总产量90％以上。在中国，双孢蘑菇消费市场发展迅速，鲜菇市场销售日益渐旺。

国外双孢蘑菇主要栽培品种有Sylvan公司的A15，S512、S608、130和荷兰Horst蘑菇试验站的U1、U3等。这些品种均适合本国的设施化栽培。在国内，双孢蘑菇的种质资源十分缺乏，给双孢蘑菇菌种改良和选育工作带来了相当大的困难。目前，国内双孢蘑菇主要栽培品种有As2796，2000，192，浙农1号等，但是其中只有W192菌株是我国自主选育适合工厂化生产用的工厂化菌株，其他国内双孢蘑菇的工厂化品种都是进口国外的。因此，国内双孢蘑菇工厂化菌株的缺乏限制了国内双孢蘑菇工厂化的发展。

温度是影响双孢蘑菇生长的主要因素。双孢蘑菇对温度的要求分为两个阶段，其菌丝体发育温度范围为4-32℃。双孢蘑菇菌丝生长阶段的最适合温度应保持在22-25℃。双孢蘑菇子实体生长发育的温度范围是4-25℃，对栽培环境进行温度调控是工厂化生产双孢蘑菇的主要调控因子之一。因此有必要设计一种快速筛选双孢蘑菇W192菌株的耐高温菌株的引物及方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种种植大球盖菇最优稻秸秆用量的判定方法。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种快速筛选双孢蘑菇W192菌株的耐高温菌株的引物，所述引物的序列为：

4140-1F:TTCCGTTCAGTGCTACC；

4140-1R:TGCAAAGAGAGCTGGTACA。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种快速筛选双孢蘑菇W192菌株的耐高温菌株的方法，包括下列步骤：

步骤1：提取W192菌株DNA

将待检测的W192杂交菌株或者孢子菌株在PDA平板上进行培养，然后挑取菌丝，用DNA裂解液对挑取的菌丝进行裂解，得到菌丝裂解液；

步骤2：PCR扩增

以菌丝裂解液作为PCR扩增的模板，使用权利要求1所述的引物4140-1F和4140-1R进行PCR扩增；

步骤3：如果可以扩增出产物大小为781bp的条带，则其为耐高温菌株，反之则为不耐高温菌株。

优选的技术方案为：PCR扩增程序为：94℃预变性5min，95℃变性30s，48℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环，72℃，10min，4℃保存。

优选的技术方案为：PCR扩增体系为：总体积为20μl，包括10μl的PCR mix，7ul的双蒸水，1ul的引物4140-1F，1ul的引物4140-1R和1ul的菌丝裂解液。

由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有的优点是：