[发明专利]培美曲塞多谷氨酸化代谢物及其制备方法

权利要求书

1.一种制备培美曲塞多谷氨酸代谢物的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤(1)：先用溶剂溶胀树脂，使树脂活化，然后抽滤除去溶剂，加入哌啶溶液去除掉Fmoc保护基，然后用DMF(N，N-二甲基甲酰胺)、二氯甲烷和甲醇交替洗涤，茚三酮检测呈阳性，反应完全，得到了活化并且提供缩合反应位点(伯氨基)的树脂；

步骤(2)：将脱去Fmoc的树脂与偶联试剂PyBOP(1H-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐)、6-Cl-HOBt(6-氯-1-羟基苯并三氮唑)和Fmoc-O-叔丁基-L-谷氨酸混合，加入DIPEA(N，N-二异丙基乙胺)和溶剂，振荡反应，反应完毕将溶液抽滤除去，剩余固相用DMF(N，N-二甲基甲酰胺)、二氯甲烷和甲醇交替洗涤，茚三酮检测呈阴性，反应完全，加入哌啶溶液去除掉末端谷氨酸α-氨基上Fmoc保护基，然后用DMF(N，N-二甲基甲酰胺)、二氯甲烷和甲醇交替洗涤，茚三酮检测呈阳性，反应完全，若想要得到更长的肽链，则重复步骤(2)，得到连接上谷氨酸肽链的树脂并且肽链末端暴露出α-氨基；

步骤(3)：将步骤(2)所得的树脂与PyBOP、6-Cl-HOBt和4-[2-(2-氨基-4，7-二氢-4-氧-3H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)乙基]苯甲酸混合，加入DIPEA和溶剂，振荡反应，反应完毕将溶液抽滤除去，剩余固相用DMF(N，N-二甲基甲酰胺)、二氯甲烷和甲醇交替洗涤，然后加入切割液，先在冰浴条件下切割，再移至室温下条件下继续切割，抽滤，得切割滤液；

步骤(4)：将所得的切割滤液逐滴地加入到沉淀剂中，边加边搅拌，得蓝色沉淀，然后在3000rpm，4℃条件下离心5～10min，弃去上清液，加入冰乙醚，振荡洗涤后在3000rpm，4℃条件下离心5～10min，弃去上清液，此洗涤步骤重复三次，然后室温下过夜干燥，得培美曲塞多谷氨酸代谢物粗品，通过柱层析或制备高效液相纯化获得纯品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

步骤(1)中，所述脱保护反应的温度为20～40℃，更优为25～37℃，茚三酮检测反应为90～100℃；

步骤(2)中，所述偶联反应和脱保护反应的温度为20～40℃，更优为25～37℃，茚三酮检测反应为90～100℃；

步骤(3)中，所述偶联反应和脱保护反应的温度为20～40℃，更优为25～37℃。