[发明专利]miR-3689a-5p在制备诊断或治疗肿瘤耐药性的制剂中的应用

说明书

本发明公开了miR‑3689a‑5p在制备诊断或治疗肿瘤耐药性的制剂中的应用。本发明通过不断增加药物作用浓度的方法筛选肿瘤耐药细胞株，通过检测miRNA在肿瘤耐药细胞株中的表达量，找到差异表达明显的miRNA。本发明发现miR‑3689a‑5p在耐药性的肿瘤细胞中表达量显著升高，抑制miR‑3689a‑5p在耐药性的肿瘤细胞中表达可显著降低肿瘤细胞对于顺铂的耐药性。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及miR-3689a-5p在制备诊断或治疗肿瘤耐药性的制剂中的应用。

背景技术

顺铂是一类广泛应用于肿瘤治疗的药物，以二价铂同两个氯原子和两个氨分子结合的重金属络合物，类似于双功能烷化剂，可抑制DNA的复制过程，DDP细胞最敏感，高浓度时抑制RNA及蛋白质合成。临床用于卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、肺癌、鼻咽癌、食道癌、恶性淋巴瘤、头颈部鳞癌、甲状腺癌及成骨肉瘤等多种实体肿瘤。

顺铂虽然对于肿瘤的抑制作用显著，但是随着药物的使用，很多早期对于顺铂敏感的肿瘤逐渐产生耐药性。由于顺铂与细胞内组分作用的非特异性，肿瘤细胞对于顺铂的耐药性可能来自多种途径，如减少药物积累、巯基分子的去毒作用、DNA损伤修复等。如何减小使用顺铂所带来的耐药性，是本领域急需解决的一个问题。

miRNAs是一种大小约21-23个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成。目前只有一小部分miRNAs生物学功能得到阐明。这些miRNAs调节了细胞生长，组织分化，因而与生命过程中发育、疾病有关。通过对基因组上miRNA的位点分析，显示其在发育和疾病中起了非常重要的作用。一系列的研究表明：miRNAs在细胞生长和凋亡，血细胞分化，同源异形盒基因调节，神经元的极性，胰岛素分泌，大脑形态形成，心脏发生，胚胎后期发育等过程中发挥重要作用。

本发明通过不断增加药物作用浓度的方法筛选肿瘤耐药细胞株，基于高通量测序方法，对卵巢癌细胞及正常细胞对照进行测序，获得其miRNA的差异表达数据，进而进行生物信息学分析，寻找能够表征肿瘤细胞发生耐药性的miRNA，再研究抑制该miRNA的功能，能否降低肿瘤细胞的耐药性。

发明内容

本发明的目的在于提供miR-3689a-5p在制备诊断或治疗肿瘤耐药性的制剂中的应用。

一种诊断肿瘤耐药性的标志物，所述标志物为miR-3689a-5p，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。

一种抑制肿瘤耐药性的制剂，所述制剂为miR-3689a-5p inhibitor，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。

所述肿瘤包括卵巢癌、白血病、乳腺癌、肺癌、肝癌。

一种抑制肿瘤耐药性的方法，采用miRNA海绵、miRNA Erasers、Target Masking和/或多靶点反义寡核苷酸的方法下调miR-3689a-5p的活性。

miR-3689a-5p在制备检测肿瘤耐药性的试剂中的应用。

所述检测肿瘤耐药性的试剂包括基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测肿瘤样本中miR-3689a-5p。

本发明的有益效果：本发明通过不断增加药物作用浓度的方法筛选肿瘤耐药细胞株，通过检测miRNA在肿瘤耐药细胞株中的表达量，找到差异表达明显的miRNA。本发明发现miR-3689a-5p在耐药性的肿瘤细胞中表达量显著升高，抑制miR-3689a-5p在耐药性的肿瘤细胞中表达可显著降低肿瘤细胞对于顺铂的耐药性。

附图说明

图1为耐药性的肿瘤细胞中miR-3689a-5p表达量升高。

图2为耐药细胞株转染NC miR inhibitor和miR-3689a-5p inhibitor后单克隆形成能力；