[发明专利]一种扩增效率高的干细胞培养基

说明书

本发明适用生物技术领域，提供了一种扩增效率高的干细胞培养基，由基础培养基和添加组分组成，所述添加组分包括：金雀异黄酮、亚硒酸钠、激素、蛋白质、碱性成纤维细胞生长因子，表皮生长因子，维生素及还原类物质和酶抑制剂，将金雀异黄酮加入到培养基中，其与细胞因子相互作用，相互影响，从而共同对干细胞的生长起到了良好的促进作用。采用本发明的培养基进行细胞培养，具有细胞周期短，增殖能力强，细胞均一性好，纯度高，有效的抑制干细胞的分化和内皮细胞的贴壁生长，另外该培养基不含胎牛血清等动物源成分，通过该培养基获得的干细胞适合于临床应用。

技术领域

本发明属于生物领域，尤其涉及一种扩增效率高的干细胞培养基。

背景技术

干细胞是21世纪生物医学界普遍关注的新研究课题，干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。干细胞培养基是作用于干细胞的培养过程中所需要的特殊培养环境，以达到干细胞的贴壁或增殖效果。

干细胞在再生医学和细胞治疗、药物筛选及早期胚胎发育研究中有广阔的应用前景，但其研究仍面临着巨大的挑战，其中最关键的是干细胞的培养试剂，在传统干细胞培养过程中通常需要添加一定量的胎牛血清，血清中含有细胞生长所需的生长因子、激素、载体蛋白、贴壁因子、微量元素以及其他营养物质，可以促进细胞生长，而且能够提高细胞生产的稳定性、提高细胞增殖量，以及增强细胞活性。

但是含有血清的培养基存在携带病原体污染造成纯化细胞困难的问题，且成本很高；同时，扩增效率一般。

发明内容

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明实施例提供一种扩增效率高的干细胞培养基，旨在解决现有的干细胞培养基成本高且扩增效率一般的问题。

本发明实施例是这样实现的，一种扩增效率高的干细胞培养基，包括以下步骤：

一种扩增效率高的干细胞培养基，由基础培养基和添加组分组成，所述添加组分包括：金雀异黄酮、亚硒酸钠、激素、蛋白质、碱性成纤维细胞生长因子，表皮生长因子，维生素及还原类物质和酶抑制剂；

所述金雀异黄酮的浓度为30～190ng/mL；所述亚硒酸钠的浓度为10～20ng/mL；所述激素的浓度为15～25μg/mL；所述碱性成纤维细胞生长因子的浓度为1～100ng/mL；所述表皮生长因子的浓度为0.1～2ng/mL；所述蛋白质的浓度为1～10μg/mL；所述维生素及还原类物质浓度为5～10ng/mL；所述酶抑制剂的浓度为0.1～3ng/mL。

作为本发明的进一步方案：所述基础培养基选自EM、MEM、RPMI-1640、DMEM/F12、M199或IMD。

作为本发明的进一步方案：所述激素为胰岛素。

作为本发明的进一步方案：所述蛋白质中添加浓度为0.8-3g/dL的球蛋白和2-4.4g/dL白蛋白。

作为本发明的进一步方案：所述维生素及还原类物质包括D-泛酸钙L、叶酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇、核黄素、维生素B35、维生素B60、维生素B12、肌醇、甘氨酸、L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸和L-半胱氨酸。

作为本发明的进一步方案：所述酶抑制剂为抗凝血酶III。

作为本发明的进一步方案：所述基础培养基和添加组分的体积比为1:1-10:1。

作为本发明的进一步方案：所述基础培养基和添加组分的体积比为6:1。