[发明专利]一种南方根结线虫活体卵的分离方法在审
申请号: | 202011386856.9 | 申请日: | 2020-12-01 |
公开(公告)号: | CN112335614A | 公开(公告)日: | 2021-02-09 |
发明(设计)人: | 张锋;王远征;张淑莲;李英梅;洪波;杨艺伟;付博;任平 | 申请(专利权)人: | 陕西省生物农业研究所 |
主分类号: | A01K67/033 | 分类号: | A01K67/033 |
代理公司: | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人: | 汤东凤 |
地址: | 710032 陕西*** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 南方 线虫 活体 分离 方法 | ||
1.一种南方根结线虫活体卵的分离方法,其特征在于,包括以下步骤:
①采集植物病根后,将其在实验室进行保湿放置;
②将植物根组织进行冲洗,在体视镜下,用镊子挑取足量的线虫卵囊,并将其置于含有无菌水中的离心管中;
③将含有线虫卵囊的离心管进行旋转离心,用移液器充分移除上清液;
④加入次氯酸钠溶液处理线虫卵囊,期间将样品在涡旋震荡器上反复震荡;
⑤将样品旋转离心,后用移液枪吸取上清液,弃去;
⑥加入无菌水,涡旋震荡,使卵囊样品充分混匀,旋转离心,弃上清液;
⑦重复步骤⑥,用无菌水将线虫卵囊样品充分洗涤3-5遍;
⑧加入无菌水,将样品充分混匀后于实验台上静置;
⑨用移液器吸取离心管上层的线虫卵粒悬浮液,并将其移至新的离心管中;
⑩体视镜下对线虫卵粒进行计数,并计算其对应的浓度;
根据后续实验需求,移取相应体积的卵粒悬浮液进行其它条件处理和孵化实验。
2.根据权利要求1所述的南方根结线虫活体卵的分离方法,其特征在于:所述步骤②和步骤③的离心管均为1.5mL离心管。
3.根据权利要求1所述的南方根结线虫活体卵的分离方法,其特征在于:所述步骤③和步骤⑤的旋转离心转速均为1600rpm,离心时间均为2分钟。
4.根据权利要求1所述的南方根结线虫活体卵的分离方法,其特征在于:所述步骤④的次氯酸钠溶液为1mL且有效浓度为0.3%。
5.根据权利要求1所述的南方根结线虫活体卵的分离方法,其特征在于:所述步骤①的保湿放置时间为12h~72h。
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