[发明专利]一种饲料添加剂中辅酶含量检测方法

权利要求书

1.一种饲料添加剂中辅酶含量检测方法，其特征在于, 所述的辅酶为吡咯喹啉醌二钠；所述的检测方法包括：

（1）制备标准储备液和标准工作液，所述标准储备液为1.30 mg/mL的标准储备液，标准工作液为将吡咯喹啉醌二钠的标准储备液采用逐级稀释法用稀释液配制浓度为0.2 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、5.0 mg/L、9.8 mg/L、49.0 mg/L的系列标准工作溶液；

（2）制备待测样品溶液：饲料添加剂样品于25 mL具塞比色管中，加入8mL稀释液，置于超声波振荡器中超声萃取20 min，用稀释液定容至刻度线并混匀，以水相滤膜过滤，滤液供分析用；

（3）所用仪器为高效液相色谱仪，检测器为光电二极管阵列检测器；色谱柱为反相C18柱，柱温为35±1 ℃，检测波长249nm；流动相A为乙腈，流动相：乙腈（A）-流动相盐溶液（B）=40/60等度洗脱；洗脱时间：12min；流速1.0 mL / min；进样量5 μL；

（4）标准曲线的绘制：将吡咯喹啉醌二钠的系列混标准工作溶液注入高效液相色谱仪中，在步骤（3）的色谱条件下进行等度洗脱和检测，以保留时间定性，根据各浓度所测峰面积的大小与其浓度的对应关系绘制标准曲线；

（5）结果分析：取（2）中滤液注入高效液相色谱仪中，在步骤（3）的色谱条件下进行等度洗脱和检测，测得滤液中各目标物的峰面积，以保留时间定性，根据（4）中制作的标准曲线定量，计算出待测样品中吡咯喹啉醌二钠的含量。

2.根据权利要求1所述饲料添加剂中辅酶含量检测方法，其特征在于，（1）中所述混合标准储备液的配制具体步骤为：称取1.13g磷酸氢二钠和0.95g磷酸二氢钠溶解于500mL纯水中，配制成稀释液，准确称取吡咯喹啉醌二钠对照品0.1501g，用稀释液溶解并定容至100mL，配制得浓度为1.30 mg/mL的标准储备液；（1）中所述混合标准工作溶液的配制具体步骤为：将吡咯喹啉醌二钠的标准储备液采用逐级稀释法用稀释液配制浓度为0.2 mg/L、0.5mg/L、1.0 mg/L、5.0 mg/L、9.8 mg/L、49.0 mg/L的系列标准工作溶液，所有标准储备液和标准工作溶液置于冰箱中于0 ℃ ~ 4 ℃温度下保存。

3.根据权利要求1所述饲料添加剂中辅酶含量检测方法，其特征在于，（2）中所述待测样品溶液的制备具体步骤为：称取饲料样品0.1g，精确至0.0001 g，于25 mL具塞比色管中，加入8mL稀释液，置于超声波振荡器中超声萃取20 min，用稀释液定容至刻度线并混匀，以水相滤膜过滤，滤液供分析用。

4.根据权利要求1所述饲料添加剂中辅酶含量检测方法，其特征在于，（3）中所述反相C18色谱柱规格为250 mm×4.6 mm内径，颗粒粒径5μm。

5.根据权利要求1所述一种饲料添加剂中辅酶含量检测方法，其特征在于，（4）中所述标准曲线系数不小于0.999。