[发明专利]一种非酒精性脂肪性肝炎的miRNA标志物的制备方法

说明书

一种非酒精性脂肪性肝炎的miRNA标志物的制备方法，本发明涉及非酒精性脂肪性肝炎研究技术领域，从GEO数据库中筛选出2个符合条件的人NASH相关模型miRNA测序数据集和7个符合条件的小鼠NASH相关模型的miRNA测序数据集，下载这些数据集然后分别进行miRNA差异表达分析并取交集；构建蛋氨酸胆碱缺乏饮食诱导的小鼠NASH模型，并记录小鼠体重；小鼠肝组织总RNA进行反转录；将得到的反转录产物为模板，检测得到的人和小鼠NASH中都差异表达的miRNA；将miRNA表达结果进行比对，选取表达趋势一致，且表达差异最明显的2种miRNA作为判断非酒精性脂肪性肝炎的标志物。

技术领域

本发明涉及非酒精性脂肪性肝炎研究技术领域，具体涉及一种非酒精性脂肪性肝炎的miRNA标志物的制备方法。

背景技术

非酒精性脂肪性肝炎(NASH，nonalcoholic steatohepatitis)是非酒精性脂肪肝(NAFLD，nonalcoholic fatty liver)的一种极端发展形式，定义为伴随有炎症及肝细胞损伤的脂肪变性现象的出现，主要表现是无酗酒人群肝脏脂肪蓄积，进而导致炎症和纤维化，部分患者最后会进展成肝硬化甚至肝癌。NAFLD的发病率在国内外日益增加，已经成为了全球范围的威胁公共健康的重大问题。中国成年人群NAFLD患病率最高达27％，NAFLD已取代慢性乙型肝炎成为我国第一大慢性肝病。

NASH涉及营养代谢、免疫炎症、遗传和细胞应激修复等多个方面异常。目前NAFLD的发病机制被广泛接受的是“多重打击学说”，胰岛素抵抗和肝细胞内脂质堆积为第一次打击，随后触发了一系列的细胞毒性事件，如继发的炎症反应、氧化应激、内质网应激、细胞死亡等为第二次打击。虽然目前被广泛认可的“多重打击学说”能部分揭示NAFLD的发病机制，但其病因及病理机制非常复杂，至今仍未完全阐明。NASH在组织学上呈现出小叶炎症和肝细胞气球样变特征，与NAFLD相比，具有更快的纤维化进展速度。对肝脏脂肪变性NAFLD的诊断需要有组织学或者影像技术证据显示肝细胞脂肪变，即组织学检查显示≥5％肝细胞脂肪变或磁共振技术测定的质子密度脂肪分数(proton density fat fraction，PDFF)≥5.5％。microRNAs(miRNAs)通过多种途径参与NAFLD的发生发展，如调节碳水化合物代谢、肝细胞中脂质的分解代谢等。由于循环中的miRNAs非常稳定，在血浆或血清中具有高度重复性和一致性，是指示不同肝脏疾病肝损伤和肝损害的理想替代物。NASH的强异质性可能是造成单个基因指标诊断效能低及不一致的主要原因，通过多基因联合有望提高诊断效能。遗传学、表观遗传学和组学方法不仅揭示了NAFLD发生发展的机制，也提供了许多潜在的新标志物。需继续探索新标志和组合，并对现有标志或标志组合进行大规模验证。对NASH的标志物进行多非编码RNA基因，特别是针对miRNA的联合分析研究，从组学的角度出发，结合动物实验验证，显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的缺陷和不足，提供一种设计合理的非酒精性脂肪性肝炎的miRNA标志物的制备方法，为临床在分子水平上开发非酒精性脂肪性肝炎提供了新的方法，同时为非酒精性脂肪性肝炎的治疗提供了新的药物靶点。

为达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：它的操作步骤如下：

步骤一、从National Center for Biotechnology Information(NCBI)的GeneExpression Omnibus(GEO)数据库中筛选出2个符合条件的人非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关模型miRNA测序数据集和7个符合条件的小鼠NASH相关模型的miRNA测序数据集，下载这些数据集然后分别进行miRNA差异表达分析并取交集；

步骤二、分别对步骤一中得到的9个miRNA测序数据集进行差异miRNA的表达分析，得到9组差异表达miRNA；取9组差异表达miRNA的交集，得到在人和小鼠NASH中都差异表达的miRNA；