[发明专利]FLNA、FBLN1、TSP-1作为标志物在制备石棉相关疾病检测试剂盒中的应用

说明书

本发明公开了FLNA、FBLN1、TSP‑1作为标志物在制备石棉相关疾病检测试剂盒中的应用，属于生物医学技术领域。本发明基于iTRAQ结合2D LC‑MS/MS技术筛选出血清差异蛋白Filamin A(FLNA)、Fibulin‑1(FBLN1)和Thrombospondin‑1(TSP‑1)，经进一步验证FLNA、FBLN1、TSP‑1可作为恶性间皮瘤诊断的潜在生物标志物，具有较高的灵敏度和特异度，FBLN1、TSP‑1可作为石棉肺诊断的潜在生物标志物，具有重要的临床应用价值，且多指标联合使用时，其诊断价值更高。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及FLNA、FBLN1、TSP-1作为生物标志物在制备石棉相关疾病如恶性间皮瘤、石棉肺的诊断试剂盒中的应用。

背景技术

恶性间皮瘤(malignant mesothelioma，MM)是一种相对少见，与石棉暴露密切相关的高度侵袭性肿瘤，多发生于胸膜和腹膜，还有少数发生于心包膜、输卵管浆膜、睾丸鞘膜等。该病起病隐匿，缺乏特异性临床表现，大多数患者确诊时已处于晚期，目前尚无有效治疗方案，预后很差，一般中位生存期不超过一年。恶性间皮瘤的平均潜在寿命损失年数(PYLL)为17年。由于潜伏期长(20-40年)和一些国家持续使用石棉，全球恶性间皮瘤每年死亡人数仍在增加，相应的社会经济负担也继续上升。

缺乏有效的早期诊断方法是MM生存期低的主要因素。虽然组织学和免疫组织化学方法是诊断MM的金标准，但组织活检的侵袭性和技术要求限制了其在早期筛查中的应用。影像学诊断确诊困难，且成本较高并使病人每年接受较高剂量的辐射。胸腔或腹腔积液细胞学检查在诊断MM时不够敏感和特异，并且部分MM患者早期甚至没有明显的胸水或腹水。

近年来，肿瘤标志物被广泛用于肿瘤的早期筛查、辅助诊断，提高了恶性肿瘤的生存率。尽管许多生物标志物被提出可用于恶性间皮瘤的诊断，如透明质酸、可溶性间皮素相关蛋白、骨桥蛋白、巨核细胞促进因子、腓骨蛋白-3、血清高迁移率族蛋白B1等，但多存在敏感度或特异度不够的问题，且尚需在大样本人群研究中进行验证，限制了其在临床上的应用。因此，寻找发现新一代的可用于有效诊断的标志物仍是长期需要的。

除了MM，接触石棉还可导致其他石棉相关疾病(asbestos-related diseases,ARDs)，如石棉肺、胸膜斑(pleural plaques,PP)、胸膜炎和肺癌。慢性石棉相关疾病通常在最初接触石棉纤维后潜伏20-40年后出现。因此，亟需寻找合适的用于评估石棉暴露水平、常见的ARDs，或特别是MM的生物标志物，以监测有石棉暴露史的工人及其家属。

蛋白质组学的开展和研究及其新兴技术的出现为尽早发现肿瘤标志物提供了可能。相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)结合二维液相色谱串联质谱(2D-LC-MS/MS)技术可同时对多组不同样本进行相对和绝对定量研究，且比其他蛋白质组学定量方法更加敏感，是一种理想的寻找生物标记的技术，已被应用于多种肿瘤的生物标志物研究中。血清蛋白质组学具有易得性、无侵袭性和对疾病快速反应的优点。血清蛋白的动态监测可为疾病的诊断、治疗和预后提供有价值的信息。

以iTRAQ为基础的血清蛋白质组学方法可能为筛选理想的MM生物标志物提供广阔的前景。但是，目前还没有基于iTRAQ的MM血清蛋白质组学报道。本发明期望借助iTRAQ技术联合2DLC-MS/MS技术实现高灵敏度、较好特异性的MM生物标志物的筛选。

发明内容

本发明的目的在于提供能够高灵敏度、特异性鉴别石棉相关疾病特别是恶性间皮瘤的生物标志物，将其应用于恶性间皮瘤疾病的诊断、治疗和预后评估。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种基于iTRAQ蛋白质组学技术筛选恶性间皮瘤血清生物标志物，包括以下步骤：

(1)取健康人群与恶性间皮瘤患者血清进行蛋白质提取和定量；