[发明专利]一种四氯化碳诱导淡水鱼急性肝肠联合损伤模型的建立及其应用

说明书

本发明涉及一种淡水鱼急性肝肠联合损伤模型的建立及其应用，属于水产养殖技术领域。其采用四氯化碳建立诱导淡水鱼急性肝肠联合损伤模型，并将该模型用于鱼类肝肠损伤机制研究和鱼类保护肝肠药物筛选及开发中。本发明采用四氯化碳溶液在体诱导鱼类肝肠损伤模型的方法对鱼类非特异性免疫影响最小，但因其的肝肠炎症病理表现是最适合的，模型稳定可靠，重现性好。

技术领域

本发明涉及一种淡水鱼急性肝肠联合损伤模型的建立及其应用，属于水产养殖技术领域。

背景技术

关于四氯化碳(CCl₄)肝毒的作用机制，存在多种假设，但都一致公认，其主要机制是自由基的形成及引发的链式过氧化反应。CCl₄在体内可经肝微粒体细胞色素P450代谢激活，生成两个活性自由基(CCl₃O₂和Cl)及一系列氧活性物，可与肝细胞质膜或亚细胞结构的膜脂质发生过氧化反应，膜磷脂大量降解，从而破坏细胞膜结构完整性，引起膜通透性增加，最终导致肝细胞死亡。另外，CCl₄的代谢产物能迅速与细胞成分如胞内脂质、蛋白、核脂质、核蛋白和DNA等多种大分子发生不可逆的共价结合而导致细胞死亡，特别是当自由基作用于DNA时，损伤核糖和碱基，使核酸直接破坏引起DNA链的断裂或DNA链与蛋白间交联，影响其信息传递功能以及转录和复制特性。在CCl₄代谢产物引起的脂质过氧化物和共价结合的双重作用下，导致膜脂质流动性降低、钙泵抑制、谷胱甘肽活性抑制、肝微粒和线粒体功能丧失、肝细胞内钙稳态失调及代谢紊乱，引起肝细胞损伤加剧。

肝脏是机体重要的屏障器官，也是鱼类物质和能量代谢的主要器官，具有解毒和吞噬功能。肝损伤或病变是养殖鱼类常见疾病之一，死亡率高达50％-60％。而肠道是鱼类重要的消化道器官和粘膜免疫屏障器官，不仅具有对营养物质消化吸收的功能，同时还有通过稳定健康的肠道微生物群落结构地域外源应激源侵袭的作用。肝-肠损伤模型是为更好的研究肝-肠疾病发病机制以及筛选相关治疗药物而构建的一种理想动物实验模型。然而在鱼类中，尚未发现有关鱼类氧化应激肝损伤模型的构建方法，因此严重制约了鱼类肝-肠损伤机制以及免疫增强药物的筛选和开发。

发明内容

本发明的目的是克服上述不足之处，提供一种四氯化碳诱导淡水鱼急性肝肠联合损伤模型的建立及其应用，能够更好的研究淡水鱼类肝-肠轴联合损伤的发病机制以及筛选相关治疗药物。

本发明的技术方案，一种四氯化碳诱导淡水鱼急性肝肠炎症模型的建立，步骤如下：

(1)养殖鱼：将30-60g健康的幼鱼转移入室内可控温的循环水系统中，适应2周，适应期间投喂基础饲料；

(2)四氯化碳溶液的配制：以油脂为溶剂溶解四氯化碳，配置体积浓度为10％-20％的四氯化碳溶液；

(3)诱导炎症：取步骤(1)所得养殖鱼，腹腔注射步骤(2)配置的四氯化碳溶液；

(4)检测：注射12h、24h、48h、7d后，麻醉后采集血液、肝脏和肠道组织，在血液中测定肝损伤指标，在肝组织中测定抗氧化指标，通过病理切片分析肝脏和肠道损伤程度。

进一步地，步骤(1)所述养殖条件为：温度27-29℃，溶氧≥6mg/L，pH6.8-7.5，氨氮含量≤0.2mg/L，亚硝酸盐含量≤0.2mg/L，自然光照周期。

进一步地，所述淡水鱼重量为50g。

进一步地，步骤(2)中所述油脂具体为橄榄油。

进一步地，步骤(2)所述四氯化碳溶液的体积浓度为15％。

进一步地，步骤(3)所述注射剂量为每kg鱼体重注射3-6mL四氯化碳溶液，每隔12-48h注射一次，连续注射2-3次。

进一步地，步骤(3)所述注射剂量为每kg鱼体重注射4mL，作用时间为24h。