[发明专利]用于装配具有多个亚基的蛋白的方法在审
| 申请号： | 202011391544.7 | 申请日： | 2013-11-07 |
| 公开（公告）号： | CN112480218A | 公开（公告）日： | 2021-03-12 |
| 发明（设计）人： | R.戴维斯;R.陈;A.比比罗;D.科伦布伦;M.多尔瓦特 | 申请（专利权）人： | 吉尼亚科技公司 |
| 主分类号： | C07K14/31 | 分类号： | C07K14/31;C07K19/00;C12N9/12;C12Q1/6869;G01N33/487 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 任晓华;李志强 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 装配 具有 多个亚基 蛋白 方法 | ||
1.一种用于装配具有多个亚基的蛋白的方法，所述方法包括：
(a) 提供多个第一亚基；
(b) 提供多个第二亚基，其中相对于所述第一亚基修饰所述第二亚基；
(c) 使所述第一亚基与所述第二亚基以第一比率接触以形成多个具有所述第一亚基和所述第二亚基的蛋白，其中所述多个蛋白具有所述第一亚基与所述第二亚基的多个比率；以及
(d) 分级分离所述多个蛋白以富集具有第二比率的所述第一亚基与所述第二亚基的蛋白，其中所述第二比率为每(n-1)个第一亚基一个第二亚基，其中'n'为构成所述蛋白的亚基的数量。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述蛋白为纳米孔。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述纳米孔与α-溶血素至少80%同源。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述第一亚基或所述第二亚基包含纯化标记。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述纯化标记为多组氨酸标记。
6.如权利要求1所述的方法，其中使用离子交换色谱进行(d)中的所述分级分离。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述第二比率为每6个第一亚基1个第二亚基。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述第二比率为每5个第一亚基2个第二亚基并且单个聚合酶附接于每个所述第二亚基。
9.如权利要求1所述的方法，其中所述第二亚基包含化学活性部分。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述方法还包括(e)进行反应以使实体附接于所述化学活性部分。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述蛋白为纳米孔且所述实体为聚合酶。
12.如权利要求1所述的方法，其中所述第一亚基为野生型。
13.如权利要求1所述的方法，其中所述第一亚基和/或第二亚基为重组的。
14.如权利要求1所述的方法，其中所述第一比率约等于所述第二比率。
15.如权利要求1所述的方法，其中所述第一比率大于所述第二比率。
16.如权利要求1所述的方法，其还包括将具有所述第二比率的亚基的蛋白插入双层。
17.如权利要求1所述的方法，其还包括借助于具有所述第二比率亚基的蛋白对核酸分子测序。
18.一种包含多个亚基的纳米孔，其中聚合酶附接于所述亚基中的一个并且至少一个且少于所有的所述亚基包含第一纯化标记。
19.如权利要求18所述的纳米孔，其中所述纳米孔与α-溶血素至少80%同源。
20.如权利要求18所述的纳米孔，其中所有所述亚基包含第一纯化标记或第二纯化标记。
21.如权利要求18所述的纳米孔，其中所述第一纯化标记为多组氨酸标记。
22.如权利要求18所述的纳米孔，其中所述第一纯化标记在具有所述附接的聚合酶的亚基上。
23.如权利要求18所述的纳米孔，其中所述第一纯化标记在不具有所述附接的聚合酶的亚基上。
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