[发明专利]耐氧化胁迫的短双歧杆菌grx201及其应用

说明书

本发明公开了一株耐氧化胁迫的短双歧杆菌grx201及其应用。短双歧杆菌grx201能够在常规有氧环境下生长，保藏编号为CGMCC NO.20929。本发明的短双歧杆菌grx201在常规培养条件下活菌高于10⁹CFU/mL，达到了厌氧培养条件下的92％，在实际应用过程中，能够大幅降低对生产设备、产品包装和消费过程的厌氧需求，在益生菌制品领域具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及食品生物技术领域，涉及一株耐氧化胁迫的短双歧杆菌grx201及其应用。

背景技术

双歧杆菌属和乳杆菌属是目前主要的可应用于食品的益生菌。双歧杆菌是人体正常菌种之一，是婴儿肠道的优势菌群。大量研究表明双歧杆菌具有调整肠道菌群、调节免疫、防治腹泻等益生功能。双歧杆菌属占有婴幼儿益生菌市场的大半份额。

短双歧杆菌具有耐胃酸和耐胆汁性能，可长时间定殖于人体内。将双歧杆菌应用于发酵乳和发酵饮品等发酵食品，并利用生物技术提高产品品质和稳定性，能够降低益生菌摄入成本，提升益生菌摄入体验，有助于促进功能食品大众化，提升消费者身体素质。但是双歧杆菌属于严格厌氧微生物，其活性在生产、运输、贮藏和消费过程中极易受到氧化胁迫的损伤，活菌数较低，益生功能难有保障。采用耐氧化胁迫的双歧杆菌，能够降低食品生产、运输和贮藏过程中的设备要求，减少消费过程中菌体活性的损失。现有研究表明，耐氧化胁迫的双歧杆菌多属于B. choerinum和B. boum等未进入国家允许使用在食品中的菌种。国内抗氧化研究多集中于菌株对活性氧簇的清除能力，较少研究菌株本身在氧化环境中的生长能力；国外比较耐氧化能力的相对生长能力法测定菌株的光学密度，未对活菌数量作出直接比较。

发明内容

本发明的目的在于提供一株生长能力强，耐酸特性好，且能够在非厌氧条件下存活并生长的耐氧化胁迫的短双歧杆菌。

发明人以氧胁迫较强的健康人体的乳汁为菌源筛选双歧杆菌，对生长能力较强的双歧杆菌分别进行模拟人工胃液（pH 2.5）和0.1%胆盐耐性实验，筛选对胃肠道环境耐性较强的菌株，最后将菌株在常规氧化环境下进行培养，获得一株可在常规环境下生长的短双歧杆菌菌株，命名为短双歧杆菌grx201(Bifidobacterium brevegrx201) 。该菌株已于2020年10月21日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.20929。

本发明还提供上述短双歧杆菌grx201的培养方法，具体步骤如下：将短双歧杆菌grx201接种至改良MRS液体培养基中，初始培养pH为6.5，培养温度为37℃，厌氧培养。

本发明中，所述的改良MRS液体培养基的配方为：蛋白胨10.0 g/L，牛肉浸粉8.0g/L，酵母浸粉4.0 g/L，葡萄糖20.0 g/L，磷酸氢二钾2.0 g/L，柠檬酸氢二铵2.0 g/L，乙酸钠5.0 g/L，硫酸镁0.2 g/L，硫酸锰0.04 g/L，吐温80 1.0 g/L，莫匹罗星锂盐50 mg/L，半胱氨酸盐酸盐500 mg/L，水。

进一步地，本发明提供上述短双歧杆菌grx201在制备益生菌制品中的应用。

本发明中，所述的益生菌制品为食品医药领域常规的益生菌制品，包括但不限于发酵乳、乳饮料、活菌制剂、发酵果蔬饮料等。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明的短双歧杆菌grx201在24小时内可达到稳定期，耐模拟人工胃液和0.1%胆盐的能力分别达到65%和70%。在常规培养条件下活菌高于10⁹ CFU/mL，达到了厌氧培养条件下的92%，远高于最著名的动物双歧杆菌乳亚种bb-12（文献数据为29.4%）。本发明的短双歧杆菌grx201在应用过程中，能够大幅降低对生产设备、产品包装和消费过程的厌氧需求，在益生菌制品领域具有广泛的应用前景。