[发明专利]一种基于微流控芯片的新冠肺炎模型构建方法

权利要求书

1.一种基于微流控芯片的新冠肺炎模型构建方法，其特征在于，该新冠肺炎模型构建方法基于微流控芯片，模拟构建肺气血屏障和肺组织免疫微环境的细胞组成，感染新冠病毒后出现的肺组织病理生理变化情况。

2.根据权利要求1所述基于微流控芯片的新冠肺炎模型构建方法，其特征在于，细胞包括肺泡上皮细胞，肺微血管内皮细胞及循环免疫细胞。

3.根据权利要求1所述基于微流控芯片的新冠肺炎模型构建方法，其特征在于，所述微流控芯片包含肺侧通道和血管侧通道，肺侧通道位置在上，血管侧通道位置在下，两层通道间由聚二甲基硅氧烷楔形多孔膜隔开。

4.根据权利要求3所述基于微流控芯片的新冠肺炎模型构建方法，其特征在于，肺侧通道细胞表面暴露于新冠病毒颗粒(SARS-CoV-2)。

5.根据权利要求1所述基于微流控芯片的新冠肺炎模型构建方法，其特征在于，所述微流控芯片由上层芯片和下层芯片PDMS粘合封接而成，上层芯片通道的一端设有肺泡上皮细胞入口池(1)和废液池(2)；下层芯片通道的一端设有血管内皮细胞入口池(3)和废液池(4)。

6.根据权利要求1所述基于微流控芯片的新冠肺炎模型构建方法，其特征在于具体步骤如下：

(1)芯片预处理

胶原修饰芯片通道，PBS冲洗2次；

(2)细胞的接种与培养

肺微血管内皮细胞调整至1～5×10⁶cells/mL的细胞悬液，接种于芯片下层通道，芯片倒置放入培养箱2h后正置；肺泡上皮细胞调整至1～5×10⁶cells/mL的细胞悬液，加入上层芯片主通道，细胞贴附于聚二甲基硅氧烷楔形多孔膜界面生长，将芯片平移放入37℃培养箱中继续培养；12h后应用微流体驱动方法进行持续灌流；

(3)外周血单个核提取：取抗凝外周血，与磷酸缓冲盐溶液按照1:1稀释，加至淋巴细胞分离液Ficoll表面，水平离心400g×30分钟，取单个核细胞层，PBS清洗2次，加入1640+10％FBS培养基培养，使用时按照1x106/ml加至下层通道；

(4)病毒感染：芯片上层通道加入新冠病毒，1h后冲洗，之后上下层通道每日换液。

7.按照权利要求6所述的新冠肺炎模型构建方法，其特征在于：所构建的模型为接近体内肺组织细胞和基质组成的三维病理模型。

8.按照权利要求1所述的新冠肺炎模型构建方法，其特征在于：同时研究新冠病毒感染对肺细胞功能，组织屏障，炎症因子释放多方面影响。