[发明专利]基于表达调控技术的番茄基因在花柄脱落过程中的应用

权利要求书

1. 基于表达调控技术的番茄基因在降低花柄脱落中的应用，其特征是：通过基因沉默技术或基因敲除技术使番茄基因SlIDL6降低或不表达，进而延缓番茄花柄脱落，增强座果率；所述番茄基因SlIDL6的核苷酸序列见SEQ ID NO：1。

2. 根据权利要求1所述的基于表达调控技术的番茄基因在降低花柄脱落中的应用，其特征是：通过基因沉默技术使番茄基因SlWRKY17不表达，从而降低基因SlIDL6的表达，进而延缓番茄花柄脱落，增强座果率；所述番茄基因SlWRKY17的核苷酸序列见SEQ ID NO：2。

3. 根据权利要求1所述的基于表达调控技术的番茄基因在降低花柄脱落中的应用，其特征是：所述通过基因沉默技术使番茄基因SlIDL6降低或不表达的方法，主要包括以下步骤：（1）番茄基因RNA提取；（2）反转录cDNA；（3）PCR扩增基因cDNA序列；PCR扩增引物为SlIDL6-F和SlIDL6-R核苷酸序列分别为 SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4；PCR扩增产物胶回收后的片段加A尾反应；（4）连接pMD-18T-T载体；（5）上述SlIDL6连接产物分别转化大肠杆菌；（6）构建诱饵载体，使用带有酶切位点的引物进行片段扩增；扩增引物SlIDL6-pAbAi-F和 SlIDL6-pAbAi-R核苷酸序列分别为SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8；目的片段SIIDL6选择ACC65Ⅰ，SalⅠ两个酶切位点进行双酶切反应，获得pAbAi-SlIDL6载体；连接产物转化农杆菌，获得沉默slidl6农杆菌培养液，将制备的沉默slidl6农杆菌培养液通过叶盘共培养转化为延缓番茄花柄脱落的番茄株系。

4. 根据权利要求1所述的基于表达调控技术的番茄基因在降低花柄脱落中的应用，其特征是：所述通过基因敲除技术使番茄基因SlIDL6不表达的方法，主要包括以下步骤：选择敲除两个靠近基因编码区5'端、GC含量不低于50%的靶序列；两个sgRNAs经PCR 90℃ 4min,70℃ 10min, 55℃ 10min, 40℃ 10min, 25℃ 10min退火后，通过EcoRV酶切位点GATATC插入pCas9/sgRNA载体；通过DNA重组技术构建CRslidl6载体；所述两个靶序列的核苷酸序列分别为SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12；将上述CRslidl6载体转化导入农杆菌LBA4404细胞，再通过叶盘共培养转化为野生型番茄，获得延缓番茄花柄脱落的株系。