[发明专利]一种核酸释放剂及其核酸释放方法

说明书

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其是指一种核酸释放剂包括体积百分含量为1~10%的聚乙二醇辛基苯基醚、体积百分含量为1‑10%的乙基苯基聚乙二醇、体积百分含量为1‑3%的山梨醇酐单月桂酸酯、0.5‑500mM氨丁三醇、50‑200mM氯化钠、质量体积浓度为0.1‑5mg/ml的蛋白酶K、质量体积比为1‑10%的水甜菜碱、0.1‑50mM乙二胺四乙酸、0.1‑5mM核酸酶抑制剂、3‑10mM牛血清白蛋白；利用一种核酸释放剂的核酸释放方法，具体步骤如下：S1，制备核酸释放剂；S2，刮取人表皮粘膜细胞浸润到核酸释放剂中；S3，室温静置15分钟；S4，瞬时离心，吸取上清获得释放的核酸。本发明能大幅度缩短核酸提取纯化时间、免去核酸的回收步骤、避免核酸丢失或污染，同时具有操作简单的优势。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其是指一种核酸释放剂及其核酸释放方法。

背景技术

呼吸道感染（Respiratory tract infection, RTI）是人类最常见的一类疾病，可以在任何性别、年龄和地域中发生，是全球范围内引起人群发病和死亡的最主要原因之一。目前已证明，大部分呼吸道疾病是由细菌、病毒或其他病原体引起，其中以呼吸道病毒最常见。病毒性感染的潜在危害极大，例如新型冠状病毒（SARS-CoV-2），该病毒是一种先前未在人类中发现的新型冠状病毒，可导致急性感染性肺炎（COVID-19），感染者初始症状多为发热、乏力和干咳。后续逐渐出现呼吸困难，严重者可出现急性呼吸窘迫综合征或脓毒症休克，甚至死亡。

病毒性感染防控的最有效措施是早诊早治，实时荧光PCR检测咽拭子中的病毒核酸是现阶段临床最快速的检测方法，然而，检测前样本中核酸的提取和纯化是整个实验中最耗时、最繁琐的过程，严重影响样本检测的速度以及现场应用。迄今为止，核酸提取方法主要有煮沸法、离心柱法以及磁珠法。煮沸法和离心柱法，均存在操作步骤繁琐，核酸容易污染的不足；磁珠法提取步骤简单，回收效率高，易于自动化提取，但产品价格十分昂贵，目前应用并不广泛。同时样本制备也是最核心、最危险的一个环节，一般情况下，工作人员在样本制备区要严格进行生物安全三级防护装备后，并在生物安全柜中完成核酸提取相关实验，既要防止病毒感染，又要防止样本被污染，造成结果不准确。因此，开发一种能快速释放核酸、不易造成交叉污染并且对后续核酸检测实验无影响的核酸快速释放方法成为目前亟待解决的问题。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种核酸释放剂及其核酸释放方法，能大幅度缩短核酸提取纯化时间、免去核酸的回收步骤、避免核酸丢失或污染，同时具有操作简单的优势。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种核酸释放剂，包括体积百分含量为1~10%的聚乙二醇辛基苯基醚、体积百分含量为1-10%的乙基苯基聚乙二醇、体积百分含量为1-3%的山梨醇酐单月桂酸酯、0.5-500mM氨丁三醇、50-200mM氯化钠、质量体积浓度为0.1-5mg/ml的蛋白酶K、质量体积比为1-10%的水甜菜碱、0.1-50mM乙二胺四乙酸、0.1-5mM核酸酶抑制剂、3-10mM牛血清白蛋白。

优选地，所述的体积百分比是以无菌水为基准。

优选地，所述氨丁三醇的pH值为7.0-7.5。

优选地，所述氯化钠的pH值为7.0-7.5。

利用所述的一种核酸释放剂的核酸释放方法，包括以下步骤：

S1，制备核酸释放剂；

S2，使用采样拭子轻轻刮取人表皮粘膜细胞，将拭子棉球部位浸润到S1中制备好的核酸释放剂中；

S3，缓慢摇晃所述S2中核酸释放剂管体，待棉球全部浸润之后，盖紧管盖，反复颠倒混匀20次，室温静置15分钟；

S4，将S3中静置完成的液体上下颠倒混匀30秒后瞬时离心，吸取4微升上清获得释放的核酸。