[发明专利]人工构建几丁质小体多酶复合体scaford-chiC-chiA-sg的方法及应用

权利要求书

1.一种人工构建几丁质小体多酶复合体scaford-chiC-chiA-sg的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，蛋白支架scaford-ChBD的构建

将纤维小体中的三个不同的粘连蛋白cohesinI-1，cohesinII，cohesinI-3以及一个几丁质结合域ChBD, 融合表达构建蛋白支架scaford-ChBD；

步骤2，几丁质酶-dockerins的构建

分别在几丁质降解中起关键作用的三种酶：几丁质内切酶chiC、几丁质外切酶chiA、N-乙酰氨基葡萄糖苷酶sg的C端融合锚定蛋白dockerin1、dockerin2、dockerin3，分别形成chiC-doc1，chiA-doc2，sg-doc3；

步骤3，几丁质小体scaford-chiC-chiA-sg的胞外自组装

将纯化得到的蛋白支架scaford-ChBD和三种带dockerins的几丁质酶在体外自组装形成多酶复合体scaford-chiC-chiA-sg。

2.根据权利要去1所述的一种人工构建几丁质小体多酶复合体scaford-chiC-chiA-sg的方法，其特征在于，步骤1中所述蛋白支架scaford-ChBD中的粘连蛋白cohesinI-1，cohesinII，cohesinI-3分别来自于菌株Clostridium cellulovorans, Clostridium cellulolyticum, 和Clostridium thermocellum，几丁质结合域基因ChBD来自菌株Chitinolyticbacter meiyuanensi SYBC-H1。

3.根据权利要去1所述的一种人工构建几丁质小体多酶复合体scaford-chiC-chiA-sg的方法，其特征在于，步骤2中所述的锚定蛋白dockerin-I-1、dockerin-II、dockerin-I-3，分别来自于菌株Clostridium cellulovorans, Clostridium cellulolyticum, 和Clostridium thermocellum；几丁质酶chiA与几丁质酶chiC来自于菌株Serratia marcescens，几丁质酶sg来源于菌株Chitinolyticbacter meiyuanensi SYBC-H1。

4.根据权利要去1所述的一种人工构建几丁质小体多酶复合体scaford-chiC-chiA-sg的方法，其特征在于，步骤3中所述的几丁质小体scaford-chiC-chiA-sg胞外自组装的条件为：蛋白支架scaford-ChBD：chiC-doc1：chiA-doc2：sg-doc3的蛋白摩尔比为1：1：1：1，于4℃，200rpm，pH7.0条件下孵育2h。

5.根据权利要去4所述的一种人工构建几丁质小体多酶复合体scaford-chiC-chiA-sg的方法，其特征在于，所添加的蛋白支架scaford-ChBD、chiC-doc1、chiA-doc2、sg-doc3的蛋白浓度均为0.2μM或0.4μM。

6.基于权利要求1所述的多酶复合体scaford-chiC-chiA-sg在降解几丁质制备N-乙酰氨基葡萄糖上的应用。

7.根据权利要去6所述的应用，其特征在于，所述几丁质为粉粒几丁质或胶体几丁质或高压均质处理过的几丁质中的一种或多种。