[发明专利]miRNA组合、含其的试剂盒及在肺癌诊断中的应用

说明书

本发明公开了一种miRNA组合，其包括miR‑191和/或miR‑454。还公开了一种肺癌诊断系统，其包括输入模块、分析模块；以及一种可实现肺癌诊断系统的功能的计算机可读介质及运行该计算机可读介质的肺癌诊断装置。本发明的miRNA组合可用于制备检测其的探针，并在制备检测肺癌的诊断剂或筛选治疗肺癌的药物中有广泛的用途。

技术领域

本发明属于生物医学检测领域，涉及一种miRNA组合、含其的试剂盒及在肺癌诊断中的应用。

背景技术

肺癌是发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，占所有癌症病死率两成以上。中国年新增肺癌80多万，60-80％新发病例为晚期。早期肺癌患者术后5年生存率可达90％(0期)-60％(I期)，而II-IV期患者则从40％骤降至5％。肺癌初期多无特异临床症状，因症就诊的患者80％已经处于疾病晚期，失去了最佳治疗时期和手术的机会。因此，早期肺癌的有效诊断是提高肺癌患者的治愈率和生存率的关键。

胸部CT发现的早期肺癌几乎均为结节状，对于微结节、小结节很难确定性质，肺内很多疾病均可表现为结节状，常见有结核、炎症、感染、霉菌、节段不张、出血等，如何从中鉴别出肺癌，是肺癌防治工作面临的巨大挑战。肺部结节发病率25-35％，中国的待排查人群3-5亿。结节类型很多，现有的影像在早期癌变的情况下确诊难度极大，从而让早期恶性结节患者错过了最佳干预治疗时机。影像学诊断主要从密度上分为纯磨玻璃结节、部分实性磨玻璃结节和纯实性磨玻璃结节，再结合结节的大小、生长速度、内部钙化、空泡形成、边缘结构、周围血管及邻近胸膜变化等分析，人为影响因素多。2011年美国国家肺癌筛查研究(NLST)中，低剂量螺旋CT筛查组中39.1％曾怀疑肺癌，最后证明其中96.4％为假阳性，不是肺癌，因此，胸部影像检查能筛查出结节，但是并不能针对最早期的肺癌进行诊断，而且反复多次检查造成电离辐射暴露伤害。因此，需要对肺结节患者通过生物标志物进行及时的肺结节良恶性确诊，从而能够进行及时的临床干预，将能极大程度降低晚期肺癌的发生率，提高生存率。

肺癌常见的早期筛查及诊断大多依靠肿瘤标志物、胸部CT、气管镜及结节穿刺活检等。临床常用的肺癌相关肿瘤标志物包括癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)、胃泌素释放肽前体(Pro-GRP)、糖类抗原125(CA125)、谷胱甘肤-S-转移酶-π(GST-π)、芳烃羟化酶(AHH)、端粒酶等，但对肺癌早期诊断的灵敏度很低,导致早期肺癌患者被漏诊(Liu et al,BioMedRes.Int.2017,2013989)

目前，其他诊断方法如CT引导下病灶穿刺及各种纤维支气管镜技术，均为有创检查，给患者带来一定风险，且对病灶部位和操作人员都有一定要求。近几年兴起的液体活检技术，可以监测肿瘤或转移灶释放到血液的循环肿瘤细胞(CTC)和循环肿瘤DNA(ctDNA)，多集中于肺癌疗效及预后判断的研究。因此，迫切需要开发无创、准确、高效的早期肺癌诊断标记物，在早期阶段帮助鉴别肺恶性结节，从而提高肺癌早诊率、降低肺癌死亡率、降低医疗检查费用，切实提高人民的生活质量，服务大众。

国内外诸多前沿生物技术公司在研发诊断肺结节/早期肺癌的生物标志物，主要集中在ctDNA的突变和甲基化，自免疫抗体和miRNA等。但是都受限于灵敏度不足或者可产品化困难，无法满足临床的需求。以目前研发热点ctDNA在早期肺癌的诊断为例，Grail Bio通过ctDNA甲基化作为早期肺癌标记物，在I期肺癌上的诊断灵敏度在20-40％区间(Taylor,Ann Oncol.2020，31(9)，1266-1267)，未能满足早期肺癌诊断的需求，而且操作难度大，检测成本高。基因的DNA甲基化作为肺癌的标记物，通过肺泡灌洗液取样后，对脱落细胞进行PCR的甲基化检测，取样难度大，检测操作繁琐，对肺腺癌的灵敏度只有66％。以英国的Oncoimmune公司和杭州凯宝罗为代表的7种自免疫抗体进行的肺癌检测，灵敏度约40-50％。