[发明专利]一种高产β-丙氨酸的基因工程菌及共培养制备D-泛酸有效
| 申请号： | 202011400372.5 | 申请日： | 2020-12-04 |
| 公开（公告）号： | CN112625985B | 公开（公告）日： | 2022-05-31 |
| 发明（设计）人： | 柳志强;陈力;张博;李波;王培;郑裕国 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12N15/60;C12N15/54;C12P39/00;C12P13/06;C12P13/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 浙江千克知识产权代理有限公司 33246 | 代理人： | 冷红梅 |
| 地址： | 310014 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高产 丙氨酸 基因工程 培养 制备 泛酸 | ||
1.一种高产β-丙氨酸的基因工程菌，按如下方法构建获得：
(1)以基因工程菌E.coli CCTCC NO：M 2018914为出发菌株，将其基因组中的panD基因的启动子替换为Trc启动子，得到工程菌E.coli W3110(DE3)，Trc-panD，记为ALA1；
(2)将工程菌E.coli W3110(DE3)，Trc-panD基因组中的aspC基因的启动子替换为Trc启动子，得到E.coli W3110(DE3)，Trc-panD/Trc-aspC，记为ALA2；
(3)将E.coli W3110(DE3)，Trc-panD/Trc-aspC基因组中ppc基因的启动子替换为Trc启动子，得到E.coli W3110(DE3)，Trc-panD/Trc-aspC/Trc-ppc，记为ALA3；
(4)将E.coli W3110(DE3)，Trc-panD/Trc-aspC/Trc-ppc基因组中的pykA基因敲除，得到E.coli W3110(DE3)，Trc-panD/Trc-aspC/Trc-ppc/ΔpykA，记为ALA4；
(5)将E.coli W3110(DE3)，Trc-panD/Trc-aspC/Trc-ppc/ΔpykA基因组中的pykF基因敲除，得到E.coli W3110(DE3)，Trc-panD/Trc-aspC/Trc-ppc/ΔpykA/ΔpykF，记为ALA5；
(6)将E.coli W3110(DE3)，Trc-panD/Trc-aspC/Trc-ppc/ΔpykA/ΔpykF基因组中的ptsG基因敲除，得到E.coli W3110(DE3)，Trc-panD/Trc-aspC/Trc-ppc/ΔpykA/ΔpykF/ΔptsG，记为ALA6；
(7)将E.coli W3110(DE3)，Trc-panD/Trc-aspC/Trc-ppc/ΔpykA/ΔpykF/ΔptsG基因组中的glk基因的启动子替换为Trc启动子，得到E.coli W3110(DE3)，Trc-panD/Trc-aspC/Trc-ppc/ΔpykA/ΔpykF/ΔptsG/Trc-glk，记为ALA7；
(8)以质粒pET28a为载体，连接来自Corynebacterium glutamicum ATCC 13032的panD基因得到新的质粒pET28a-panD，记为pD；
(9)以步骤(8)构建好的质粒pD为载体，继续连接来自E.coli W3110的aspC基因得到新的质粒pET28a-panDaspC，记为pDC；
(10)以步骤(9)构建好的质粒pDC为载体，继续连接来自得E.coli W3110的gdhA基因得到新的质粒pET28a-panDaspCgdhA，记为pDCA；
(11)将步骤(10)构建好的质粒导入步骤(7)获得的菌株ALA7中，得到菌株ALA7/pDCA，即为所述高产β-丙氨酸的基因工程菌。
2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于所述Trc启动子序列如SEQ ID No.1所示，所述panD基因序列如SEQ ID No.2所示，所述aspC基因序列如SEQ ID No.3所示，所述gdhA基因序列如SEQ ID No.4所示。
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