[发明专利]大豆提取物Bowman-Birk inhibitor切割DNA的方法

说明书

本发明公开了大豆提取物Bowman‑Birk inhibitor切割DNA的方法，属于医药技术领域。本发明提供了大豆Bowman‑Birk胰蛋白酶抑制剂BBI‑A的一种新应用，将BBI‑A应用于DNA的切割中，通过条件的优化，使得切割效率可达100％，可有效切割DNA。为制备DNA结构探针、并且为潜在制备抗肿瘤药物提供了新的可能。

技术领域

本发明涉及大豆提取物Bowman-Birk inhibitor切割DNA的方法，属于医药技术领域。

背景技术

核酸是重要的生物大分子，是所有已知生命形式必不可少的组成物质，它在生物的生长、发育和繁殖等活动中，具有非常重要的作用。在核酸化学研究领域核酸切割剂具有至关重要的作用，在生物化学和分子生物学领域，核酸切割剂的研究受到人们广泛的关注，通过对核酸切割剂的研究可以获得生物体内的一些重要信息，提供生物体内核酸酶的作用机制，在医药及生物方向具有极大的研究价值。

Bowman–Birk inhibitor(BBI)是从大豆中分离出的一种典型的天然蛋白酶抑制剂,迄今为止，已从大豆中分离出五种BBI亚型(A、B、C-II、D-II和E-I)，据现有研究已知，在植物中的作用中BBI-A蛋白酶抑制剂与在人体中的作用α-1抗胰蛋白酶很相似，两者都因为这样的特点具有较高的抗癌活性，在对各自机体防护中起着至关重要的作用。正因BBI-A蛋白酶抑制剂有着这样与生命息息相关的活性，因此现在越来越多人们关注研究BBI-A。

据现有实验结果可知，国内外对BBI-A的研究主要集中在BBI-A本身的提取、分离、结构、生物活性和应用前景等，尤其是对抗炎、抗病毒领域研究较多，而在其他领域涉及较少。

因此，进一步挖掘BBI-A的潜在功能，将能够更加有助于更好地利用BBI-A。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明申请人提供了一种BBI-A来切割DNA，本发明的目的是提供一种BBI-A在质粒DNA切割方面的应用，实现了一种新的DNA切割方式。本发明BBI-A对DNA存在切割作用且确定BBI-A切割DNA的最佳条件。

本发明提供了一种DNA的切割方法，其特征在于，利用大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制剂切割DNA。

在本发明的一种实施方式中，所述大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制剂(BBI-A)的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

在本发明的一种实施方式中，在反应体系中加入1-15mg/mL的BBI-A。

在本发明的一种实施方式中，在反应体系中加入金属离子。

在本发明的一种实施方式中，所述金属离子的浓度为0.1-10mmol/L。

在本发明的一种实施方式中，所述金属离子包括Mg²⁺、Cu²⁺、Zn²⁺和/或Ca²⁺。

在本发明的一种实施方式中，反应时间不低于0.5h。

在本发明的一种实施方式中，反应温度为35-40℃。

本发明提供了一种DNA切割试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括缓冲液、大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制剂和金属离子。

在本发明的一种实施方式中，所述金属离子包括Mg²⁺、Cu²⁺、Zn²⁺和/或Ca²⁺。

本发明提供了所述BBI-A，或所述方法，或所述试剂盒在切割DNA中的应用。

本发明的有益效果：