[发明专利]一种用于人皮肤成纤维细胞的扩增培养基及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于人皮肤成纤维细胞的扩增培养基，包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括以下原料：胰岛素、肌醇六磷酸、发芽糙米粉、阿魏酰聚糖、纳米氧化锌、甲壳素、亚硒酸钠。本发明提供的扩增培养基，成分明确，不含外源血清及动物源蛋白，安全性更高，添加剂中的肌醇六磷酸、发芽糙米粉有利于保持人皮肤成纤维细胞扩增过程中增殖的稳定性，提高细胞增长速率，添加剂中的阿魏酰聚糖、纳米氧化锌可以提高人皮肤成纤维细胞的增殖活性，避免细胞凋亡，进而提高增殖效率。还添加甲壳素和亚硒酸钠，对细胞起到抗氧化的保护作用。本发明还提供了一种用于人皮肤成纤维细胞扩增培养基的制备方法，制备过程简便，便于商业化。

技术领域

本发明涉及一种培养基，尤其涉及一种用于人皮肤成纤维细胞的扩增培养基及其制备方法。

背景技术

成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞功能活动旺盛，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损以及骨创伤的修复有着十分重要的作用。成纤维细胞的独特性能帮助修复受损皮肤，并降低年龄老化对皮肤的影响。

皮肤的成纤维细胞广泛分布于真皮组织中，成纤维细胞通过分泌多种物质构成细胞外基质，从而形成结缔组织，对机体发挥结构性功能。成纤维细胞在人的一生中发挥重要作用，如在胚胎期指导皮肤形成，器官成熟后参与皮肤稳态的维持，促进损伤部位结构与功能的修复等。

成纤维细胞在人的一生中发挥重要作用，如在胚胎期指导皮肤形成，器官成熟后参与皮肤稳态的维持，促进损伤部位结构与功能的修复等。因此，体外培养自体皮肤成纤维细胞在组织工程，美容，医疗等领域具有很广泛的应用。

传统的皮肤成纤维细胞培养是在基础培养基中添加血清，但是血清的使用会带来风险隐患：血清中含有细胞生长抑制因子和毒性因子，有潜在细胞毒性；再加上血清组分复杂，批次间质量存在差异，增加了产品质量控制的难度和不稳定性；血清中潜在的病原微生物（如引起牛海绵状脑炎的朊病毒），给血清的使用带来了不容忽视的安全隐患；再加上血清培养基中的蛋白质很难通过普通分离方法彻底去除，从而造成细胞表达产物分离纯化难度较高，严重影响产品的最终质量。这些不利因素促使了培养方法的改进，用无血清细胞培养基替代血清培养基，现有的无血清培养基存在成分复杂，应用成本高，稳定性差，细胞增值率低等问题，亟需做出改进。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种用于人皮肤成纤维细胞的扩增培养基，不添加外源血清，安全性高，并且可以有效提高细胞的增殖效率。

本发明的目的之二在于提供一种用于人皮肤成纤维细胞的扩增培养基的制备方法。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种用于人皮肤成纤维细胞的扩增培养基，包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括以下原料：胰岛素、肌醇六磷酸、发芽糙米粉、阿魏酰聚糖、纳米氧化锌、甲壳素、亚硒酸钠。

进一步地，所述添加剂在基础培养基中的浓度为：胰岛素45-55μg/mL、肌醇六磷酸18-25μg/mL、发芽糙米粉20-27μg/mL、阿魏酰聚糖15-20ng/mL、纳米氧化锌5-10ng/mL、甲壳素15-20μg/mL、亚硒酸钠18-21μg/mL。

进一步地，所述基础培养基为DMEM/F12培养基。

进一步地，所述纳米氧化锌的平均粒径为20-50nm。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

上述用于人皮肤成纤维细胞的扩增培养基的制备方法，包括以下步骤：取基础培养基加入胰岛素、肌醇六磷酸、发芽糙米粉、阿魏酰聚糖、纳米氧化锌、甲壳素、亚硒酸钠，混合均匀，过滤除菌即得。

进一步地，采用0.22μm微孔滤膜进行过滤除菌。