[发明专利]一种细胞培养液及其制备方法

说明书

公开了一种细胞培养液，包括基础培养液和添加剂，该基础培养液包括85‑95v％DMEM培养液和5‑15v％胎牛血清以及5‑15mL/L的双抗储备液；该添加剂选自壳聚糖改性的纳米羟基磷灰石。此外，还公开了其制备方法。针对成骨细胞，该细胞培养液具有促进细胞增殖作用，同时对细胞矿化具有更显著的促进效果。

技术领域

本发明属于动物细胞培养技术领域；涉及一种细胞培养液及其制备方法。

背景技术

细胞培养是指细胞在体外条件的生长。体外培养细胞的生存条件有三个。第一为营养。体外培养细胞所需的营养物质主要包括糖、氨基酸和维生素。大多情况下使用合成培养基提供上述营养物质，但仍需加入人或动物的血清、血浆和胎汁等。例如，要使细胞正常生长，通常需加10-15％的小牛血清。第二为环境。无菌是保证培养细胞生存的首要条件。培养液不仅对细胞是高营养物，对细菌和霉菌也是高度营养物。部分污染微生物的繁殖速度甚至比细胞更快，而且产生毒素导致细胞死亡。细胞培养的最适宜温度为35-37℃；所需的气体主要有O₂和CO₂；适宜pH值为7.0-7.4。培养器皿处理的好坏与否对于细胞的贴壁生长影响很大。除少数悬浮生长的细胞外，绝大多数细胞属于贴壁依赖性细胞或培养物。它们只有贴附于不起化学作用的物体的表面时，才能生长、生存或维持功能。

成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负责骨基质的合成、分泌和矿化。成骨细胞由多能的间质干细胞在体内的各种调控因素的调节下发展而来，调控因素主要有BMP-2；其能诱导基质细胞向成骨细胞分化。成骨细胞为梭形、锥形或立方形，胞浆嗜硷性。核位于细胞的一端，核仁明显，表面有短的突起与相邻细胞连接。

1979年Mills等人首次报道采用体外组织块培养法成功培养了人成骨细胞；随后陆续有其他人报道成功培养成骨细胞。主要的培养方法包括酶消化法和组织块法，以及改良的酶消法-组织块法联合培养方法。

成骨细胞培养所需的条件与一般细胞培养所需的条件相同，营养与环境条件要满足细胞培养的需求。

中国专利申请CN105567629A公开了一种体外培养成骨细胞的培养基。其特征在于：包括基础培养基10.0-15.0g/L，银耳多糖100-300mg/L，血清8-10mL，适量碳酸氢钠调pH值为7.2-7.6，加水定容至1L；所述的基础培养基为DMEM，α-MEM，RPMI-1640，F12，DMEM/F12；所述的银耳多糖的纯度大于75％；所述的血清为胎牛血清、小牛血清、人血清、马血清和羊血清；该培养基用于体外培养成骨细胞，能够加快成骨细胞的生长，且能减少血清的使用量。

孙晓坤研究了纳米羟基磷灰石陶瓷使用含有10％FBS的α-MEM作为完全培养基浸提72h得到的浸提液，所得成骨细胞增殖率为98.4％，与空白组100％相比无明显差异。此外，纳米羟基磷灰石陶瓷支持成骨细胞的附着和生长，并且具有良好的促进细胞矿化的作用，但上述效果仍不够显著。

针对现有技术存在的缺陷，迫切需要寻找一种针对成骨细胞培养效果更为显著的细胞培养液及其制备方法。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种细胞培养液。针对成骨细胞前体细胞，所述细胞培养液具有显著的促进细胞增殖作用，同时对细胞矿化具有更为显著的促进效果。

本发明的目的之二在于提供一种上述细胞培养液的制备方法。所述制备工艺简单易行，易于操作，适合用于规模化生产。

为实现上述目的，一方面，本发明提供了一种细胞培养液，包括基础培养液和添加剂，所述基础培养液包括85-95v％DMEM培养液和5-15v％胎牛血清以及5-15mL/L的双抗储备液；其特征在于，所述添加剂选自壳聚糖改性的纳米羟基磷灰石。

优选地，所述基础培养液包括88-92v％DMEM培养液和8-12v％胎牛血清以及8-12mL/L的双抗储备液。