[发明专利]一种木犀属专用引物及快速鉴定木犀属物种的方法

说明书

本发明涉及植物鉴定技术领域，具体涉及一种木犀属专用引物及快速鉴定木犀属物种的方法。本发明公开了一种木犀属物种鉴定专用引物及其检测和鉴定方法，该专用引物具体引物序列为：rpl32‑trnL F=SEQ ID NO.1=5’‑TTGGAATAATCTGAATCTGAATCGACTTGAC‑3’，rpl32‑trnL R=SEQ ID NO.2=5’‑TAAGTATCCGATAATACTCAAGTTC‑3’；利用本发明提供的引物对疑似木犀属物种的DNA进行扩增，仅木犀属物种可以特异性扩增出323bp的条带。本发明可用于快速检测本属物种，对木犀属物种的整理、分类研究,种质资源的保护利用和分子鉴定都起十分重要的作用。

技术领域

本发明涉及植物鉴定技术领域，具体涉及一种木犀属专用引物及快速鉴定木犀属物种的方法。

背景技术

木犀属（Osmanthus Lour.）属于木犀科（Oleaceae），最新的分子系统学研究表明，木犀属包括26个物种，其中有中国分布22个种。木犀属物种都为多年生常绿木本植物，花芳香而美丽，具有很高的观赏价值和经济价值，广泛应用于园林、食品、香精香料行业。

随着对木犀属的研究逐渐深入，快速且准确地鉴定木犀属物种是亟需解决的一大难题。目前，判断一个物种是否为木犀属的方法多是通过树势、叶片形态和着生方式、节间、花形态等传统手段，易受环境因素和人为因素影响。且木犀属物种的某些形态特征与木犀科其他属类似，传统方法难以准确鉴别。

分子鉴定方法可以直接检测出不同物种在DNA水平上的差异，不受生长阶段、环境和人为因素的影响，具有较高的特异性和准确性，能快速准确鉴定传统手段难以鉴定的物种。目前，还未有快速鉴定木犀属物种的分子鉴定方法。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种木犀属物种鉴定专用引物，克服以往形态学鉴定上存在的不足，提供准确可靠、简单快捷且灵敏度高的分子鉴定方法，对木犀属物种的整理、分类研究、种质资源的保护和分子鉴定都具有重要意义。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的方案为：

一种木犀属物种鉴定的专用引物，目标基因区域为rpl32与trnL基因间隔区，其具体引物序列如下：

rpl32-trnL F=SEQ ID NO.1=5’-TTGGAATAATCTGAATCTGAATCGACTTGAC-3’

rpl32-trnL R=SEQ ID NO.2=5’-TAAGTATCCGATAATACTCAAGTTC-3’

一种应用所述的专用引物快速鉴定木犀属物种的方法，包括以下步骤：

1）提取待测样品DNA；

2）使用rpl32-trnL引物对，以提取的DNA为模板，进行PCR扩增；

3）PCR产物利用1.5%的琼脂糖凝胶电泳进行检测，根据扩增产物的有无判断待测样品是否为木犀属物种。

步骤1）中，使利用天根生化科技有限公司的高效植物基因组DNA提取试剂盒（DP305）完成待测样品的DNA提取。

步骤2）中，25μL PCR扩增反应体系包括：2μL DNA模板；1μL正向引物；1μL反向引物；12.5μL Mix；7.5μL DDH₂O。