[发明专利]一种来源于葡萄的耐镉基因Vvmrp1S及其应用在审
申请号: | 202011405326.4 | 申请日: | 2020-12-03 |
公开(公告)号: | CN112458098A | 公开(公告)日: | 2021-03-09 |
发明(设计)人: | 韩红娟;付晓燕;姚泉洪;彭日荷;田永生;许晶;王波;李振军;王丽娟;高建杰;张福建;张文慧;邓永东;王宇 | 申请(专利权)人: | 上海市农业科学院 |
主分类号: | C12N15/29 | 分类号: | C12N15/29;C07K14/415;C12N15/84;A01H5/00;A01H6/20 |
代理公司: | 上海开祺知识产权代理有限公司 31114 | 代理人: | 张晓敏;费开逵 |
地址: | 201106 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 来源于 葡萄 基因 vvmrp1s 及其 应用 | ||
1.一种来源于葡萄的耐镉基因Vvmrp1S,其核苷酸序列如SEQ ID No 1所示。
2.含有权利要求1所述耐镉基因Vvmrp1S的重组表达载体。
3.根据权利要求3所述的重组表达载体,其特征在于,所述重组表达载体还包括双35S启动子、GUS报告基因和带内含子卡那霉素抗性标记基因。
4.如权利要求1所述来源于葡萄的耐镉基因Vvmrp1S在培育耐镉植物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述耐镉植物为拟南芥。
6.一种将所述来源于葡萄的耐镉基因Vvmrp1S转入拟南芥中的方法,包括以下步骤:
1)扩增耐镉基因
按耐镉基因Vvmrp1S的序列,设计引物,内侧引物分别为1.5ng,外侧两个引物分别为30ng,进行PCR,扩增出Vvmrp1S片段;
2)构建重组表达载体
PCR扩增结束后,回收产物,与T/A克隆载体相连,得到DNA连接产物,转化DH5α感受态细胞中;
利用BamHI和SacI进行双酶切PCR产物后,回收Vvmrp1S片段,通过T4DNA连接酶将回收的Vvmrp1S基因与含有双35S启动子的植物表达载体1301连接,酶切鉴定和序列测定获得了含有目的基因Vvmrp1S基因的重组表达载体,该表达载体还包含GUS报告基因和带内含子卡那霉素抗性标记基因;
3)转化拟南芥
利用电击法将步骤2)的重组表达载体导入根癌农杆菌LBA4404中,再以农杆菌蘸花法转化将构建好的含Vvmrp1S基因的农杆菌LBA4404转化到拟南芥中,利用潮霉素进行转化植株筛选,在潮霉素板上生长正常的小苗进行移苗,收种,进行阳性苗鉴定。
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