[发明专利]一种试剂盒及其在检测前房液中血管内皮生长因子中的应用

说明书

本发明涉及房水抗原检测技术领域，具体涉及一种试剂盒及其在检测前房液中血管内皮生长因子中的应用，该试剂盒中含有各自独立保存的以下组分：酶反应物、磁分离试剂、稳定增强剂、校准品、清洗浓缩液和底物液。本发明提供的试剂盒能够准确检测出前房液中血管内皮生长因子的含量，样本需求量小，检测所需时间短，线性范围宽，并且在使用突变型碱性磷酸酶作为磁性微粒封闭剂时，能够明显降低本底值，进而降低试剂的最低检出限，对VEGF相关眼科疾病的诊断具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及房水抗原检测技术领域，具体涉及一种试剂盒及其在检测前房液中血管内皮生长因子中的应用。

背景技术

在眼科疾病领域，尽管多数眼部疾病的精确发病机制尚不完全清楚，但近年来已经发现一些重要致盲疾病的关键致病分子，其中以血管内皮细胞生长因子(VascularEndothelial Growth Factor，VEGF)最为典型。

血管内皮细胞生长因子(VEGF)，也称血管通透性因子，是体内重要的促血管生成细胞因子，通过作用于内皮细胞的糖基化细胞有丝分裂素，在增强血管的渗透性、诱导血管发生和血管生成、内皮细胞生长、促进细胞迁移以及抑制细胞凋亡等方面发挥作用。

生理浓度的VEGF是人体发育、损伤修复和维持正常生理功能所必需的细胞因子，但其过度表达却是恶性肿瘤生长以及眼部新生血管性疾病的重要机制之一。

与VEGF表达增高密切相关的眼部新生血管性疾病包括新生血管性老年黄斑变性(nAMD，也叫湿性AMD)、特发性息肉状脉络膜血管病变(IPCV)、增殖性糖尿病视网膜病变(PDR)、糖尿病黄斑水肿(DME)、视网膜静脉阻塞(RVO)、近视性脉络膜新生血管(myopicCNV)、新生血管性青光眼、特发性脉络膜新生血管(iCNV)和特发性中心凹旁毛细血管扩张症(IJRT)等。此外，各种视网膜疾病引起的黄斑水肿、Coats病和早产儿视网膜病变(ROP)等发病也与VEGF升高有关。

目前，内眼疾病的诊断和监测技术主要局限于物理诊断、影像学诊断和病理学诊断。由于眼球是透明、浅表器官，因此眼部的物理诊断和影像学诊断技术发展的比较完善。

虽然传统的实验诊断技术早已广泛应用于系统性疾病和其他大器官疾病，比如，血液、尿液、脑脊液、胸腔积液、腹腔积液等体液的检验早已成为临床常规，但眼内液体受到取样困难和样本量少的限制，各种传统体液诊断技术在眼科领域一直没有得到应用。

此外，由于血-房水屏障的影响，前房液中的蛋白含量远低于血液。Yeoetal.(Clin.Chem.1992，38：71)，Houcketal.(JBiol.Chem.1992，267：26031)和Hanatanietal.(Biosci.Biotechnol.Biochem.1995，59：1985)等人报道的VEGF测定方法中最低检出限均较高，为μg/mL-ng/mL级别。

由此可见，开发一种新的具有较低样本需求量、较短检测时间的用于诊断VEGF相关眼科疾病的检测技术具有重要的应用价值。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有诊断VEGF相关疾病的检测技术存在的样本需求量较高、检测所需时间长、线性范围窄的缺陷。

为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种试剂盒，该试剂盒中含有各自独立保存的以下组分：

酶反应物、磁分离试剂、稳定增强剂、校准品、清洗浓缩液和底物液；

所述酶反应物中含有由碱性磷酸酶标记的血管内皮生长因子特异性抗体I；其中，在所述标记过程中，所述抗体I的活化比为60倍，所述碱性磷酸酶的活化比为20倍，所述抗体I与所述碱性磷酸酶的偶联比为1：0.75；

所述磁分离试剂中含有0.05质量％的磁性微粒，该磁性微粒上包被有血管内皮生长因子特异性抗体II；