[发明专利]具有DNA聚合酶活性的多肽、重组载体及其制备方法与应用

说明书

本发明属于生物工程领域，具体涉及具有DNA聚合酶活性的多肽、重组载体及其制备方法与应用。本发明的DNA聚合酶的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:2所示和SEQ ID NO:3所示；编码所述DNA聚合酶的核苷酸序列包括如SEQ ID NO:1所示。同时，本发明提供一种包含如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列的重组载体及其编码的DNA聚合酶、重组载体的制备方法和应用方法。本发明提供的DNA聚合酶活性的多肽、重组载体及其制备方法与应用，可在血清或土壤等样本中进行直接的聚合酶链式反应时，对样本溶液中抑制物的耐受性大幅度提高，可在样本溶液中直接有效地完成聚合酶链式反应，检测目标基因序列。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及具有DNA聚合酶活性的多肽、重组载体及其制备方法与应用。

背景技术

DNA聚合酶在细胞中的功能是作为负责DNA合成的酶。在体内，DNA聚合酶参与一系列DNA合成过程，包括DNA复制、DNA修复、重组和基因扩增。在体外，DNA聚合酶在有金属活化剂存在的情况下，以被复制的DNA模板或多核苷酸模板支配的顺序聚合脱氧核糖核苷三磷酸。在聚合酶链式扩增反应中，DNA聚合酶是不可缺少的组分。DNA聚合酶在扩增反应中的作用很关键，被广泛应用于分子诊断、大规模平行测序等检测应用中。DNA聚合酶性能会直接影响扩增效率、灵敏度、保真性等。由于聚合酶链式反应方便、快捷、准确地大规模复制目的基因片段的能力，在生命科学研究与相关领域，如医学检测、感染性疾病检测、法医学检测等，成为了无法取代的技术手段。但是，这些研究应用于体液时，多是基于将样本中的DNA提取纯化之后，然后才能进行后续的PCR扩增反应。因此，如何在体液中直接进行目标DNA序列的直接扩增和鉴定，这一类的DNA聚合酶是行业亟需开发的一类产品。

对于传统的聚合酶链式反应，其将样本中的DNA提取纯化之后进行扩增，这种扩增技术并不适用于一些场景的实际应用，譬如在血清或土壤等样本，这些应用场景涉及的血液或土壤等样本，需要对样本的DNA直接测定，而非提取DNA后进行聚合酶链式反应，而且提取纯化DNA消耗大量的时间，同时可能导致目的基因的丢失的现象；但是，未经DNA提取纯化的样本中含有很多抑制剂会严重抑制聚合酶链式反应，通过降低酶的延伸速度。因此，亟需开发一种能够用于直接扩增样本存在的DNA的DNA聚合酶。

因此，有必要提供改进的技术方案以克服现有技术中存在的技术问题。

发明内容

为解决现有技术存在的问题，本发明提供一种具有DNA聚合酶活性的多肽、重组载体及其制备方法与应用，可在血清或土壤等样本中进行直接的聚合酶链式反应时，对样本溶液中抑制物的耐受性大幅度提高，可在样本溶液中直接有效地完成聚合酶链式反应，检测目标基因序列。对血清或土壤等样本溶液浓度的检测耐受度可达到60％以上，远高于行业内最好的检测耐受性为30％。

本发明第一方面提供一种具有DNA聚合酶活性的多肽，所述多肽具有如下所示的氨基酸序列：

(1)氨基酸序列包括SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的序列；或

(2)氨基酸序列包括序列A和序列B，序列A与(1)中SEQ ID NO：2序列具有至少70％序列同一性，序列B与(1)中SEQ ID NO：3序列具有至少70％序列同一性。

优选地，序列A与(1)中SEQ ID NO：2序列具有至少80％序列同一性，序列B与(2)中SEQ ID NO：3序列具有至少80％序列同一性。更优选地，序列A与(1)中SEQ ID NO：2序列具有至少90％序列同一性，序列B与(2)中SEQ ID NO：3序列具有至少90％序列同一性。更优选地，序列A与(1)中SEQ ID NO：2序列具有至少95％序列同一性，序列B与(2)中SEQ ID NO：3序列具有至少95％序列同一性。更优选地，序列A与(1)中SEQ ID NO：2序列具有至少98％序列同一性，序列B与(2)中SEQ ID NO：3序列具有至少98％序列同一性。