[发明专利]一种大豆不育基因突变体、应用及大豆不育系的构建方法

权利要求书

1.一种大豆不育基因突变体，其特征在于，所述大豆不育基因突变体包括Glyma.13G114200基因单个碱基的突变和/或缺失形成的突变体；

优选地，所述单个碱基的突变和/或缺失导致终止密码子的形成或Glyma.13G114200基因编码蛋白motor结构域的改变。

2.根据权利要求1所述的大豆不育基因突变体，其特征在于，所述突变体包括Glyma.13G114200基因第1470bp位碱基G缺失、Glyma.13G114200基因第787bp处碱基C突变为T、Glyma.13G114200基因第73bp处碱基C缺失或Glyma.13G114200基因第1817～1827共11bp碱基缺失中的一种或两种以上的组合。

3.权利要求1所述大豆不育基因突变体在构建大豆不育系和/或育种中的应用；

优选地，所述育种的方法包括轮回选择育种、回交育种或第三代智能核不育育种。

4.一种大豆不育系的构建方法，其特征在于，包括采用基因编辑工具在野生型大豆中构建如权利要求1所述的大豆不育基因突变体，或应用包含权利要求1所述大豆不育基因突变体的大豆与野生型大豆杂交，然后筛选后代中的不育植株；

优选地，所述基因编辑工具包括CRISPR-Cas9。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述野生型大豆包括Williams 82。

6.根据权利要求4或5所述的构建方法，其特征在于，所述突变体包括Glyma.13G114200基因第73bp处碱基C缺失，所述基因编辑工具包括靶向突变位点的引物对，所述引物对的前向引物包括5’-ATGCTTCAGGTACGCCGGG-3’，所述引物对的反向引物包括5’-CCCGGCGTACCTGAAGCAT-3’。

7.根据权利要求4或5所述的构建方法，其特征在于，所述突变体包括Glyma.13G114200基因第1817～1827共11bp碱基缺失，所述基因编辑工具包括靶向突变位点的引物对，所述引物对的前向引物包括5’-ACAAGACGACCCCTCTGAGA-3’，所述引物对的反向引物包括5’-TCTCAGAGGGGTCGTCTTGT-3’。

8.根据权利要求4或5所述的构建方法，其特征在于，所述筛选后代中不育植株的方法包括花粉败育筛选的方法和/或分子标记鉴定的方法；

优选地，所述花粉败育筛选的方法包括通过观察筛选花药中未发育形成花粉的植株；

优选地，所述花粉败育筛选的方法包括通过观察筛选花药中花粉为不规则球形的植株，和/或，通过染色法筛选花粉败育率达到95.1％以上的植株；

优选地，所述分子标记鉴定的方法包括采用分子标记对大豆种子基因进行扩增，扩增产物酶切后经凝胶电泳检测判断基因组来源大豆种子的育性。

9.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，所述分子标记包括特异引物对，所述特异引物对包括上游引物5’-GATTGTGGGCCCTCTAGTCAA-3’和下游引物5’-ACGAGCATTGCAGCACACATTA-3’，所述大豆种子基因包括Glyma.13G114200基因的点突变，所述Glyma.13G114200基因的点突变包括第1470bp位碱基G缺失。

10.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，所述分子标记包括特异引物对，所述特异引物对包括上游引物5’-ACATCTTAGGCGCTTAATTGGCAT-3’和下游引物5’-ACCTACCTTCATGTCACAAGACAACT-3’，所述大豆种子基因包括Glyma.13G114200基因的点突变，所述Glyma.13G114200基因的点突变包括第787bp处碱基C突变为T。