[发明专利]检测VEGF位点靶向药对肠癌类器官影响的方法

权利要求书

1.检测VEGF位点靶向药对肠癌类器官影响的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

1)以传代消化液消化15-25min；

2)以微器官为单位均匀分配入微孔板中；

3)类器官铺板培养22-26h后换为含药培养基；

4)采用CellTiter-Glo试剂盒检测用药后类器官活力。

2.如权利要求1所述的检测VEGF位点靶向药对肠癌类器官影响的方法，其特征在于，步骤1)中的消化具体步骤为：选择状态稳定的类器官，去除培养板中培养基，并使用HBSS清洗1-2次，加入1.5mL传代消化液至培养板中，吹打基质胶，混匀后放入37℃，5％CO₂培养箱15-25min，终止消化后以1200rpm，4℃的条件离心4min，弃上清。

3.如权利要求1所述的检测VEGF位点靶向药对肠癌类器官影响的方法，其特征在于，步骤3)中的铺板具体步骤为：将复融的基质胶与类器官沉淀按13-25个/μl的比例混匀，以8μl/孔加入384孔细胞培养板中，放入37℃，5％CO₂培养箱，凝固10-15min。

4.如权利要求1所述的检测VEGF位点靶向药对肠癌类器官影响的方法，其特征在于，步骤3)中的加培养基具体步骤为：待胶凝固后每孔加入20uL预热的自制培养基，放入37℃，5％CO₂培养箱。

5.如权利要求3所述的检测VEGF位点靶向药对肠癌类器官影响的方法，其特征在于，步骤3)中的加药换液具体步骤为：培养24h后换为含药培养基，并每隔3天换液1次；其中，所用药物及其浓度如下：

药物：贝伐单抗或雷莫芦单抗；

浓度：100μM、25μM、6.25μM、1.56μM或0.39μM。

6.如权利要求1所述的检测VEGF位点靶向药对肠癌类器官影响的方法，其特征在于，步骤4)中的检测具体步骤为：加药6天后，放于22-25℃室温平衡30min，加入与培养试剂等量的CellTiter-Glo3D检测试剂，在微孔震荡仪上震荡5min，充分混匀，室温放置25min后，使用酶标仪检测发光值。