[发明专利]一种适用于香灰菌生物发酵合成2-苯乙醇的培养基

说明书

本发明提供一种适用于香灰菌生物发酵合成2‑苯乙醇的培养基。本配方为每1000 mL水中含有马铃薯200～800 g，L‑苯丙氨酸2～8 g，麦芽糖20～100 g，硫酸镁0.1～0.4 g，pH值自然，各成分均溶解121℃灭菌20 min即可使用。采用本培养基香灰菌合成2‑苯乙醇的产量高，本培养基制作简单，操作方便，易于实现工厂化。

技术领域

本发明涉及涉及微生物发酵领域，具体涉及一种适用于香灰菌生物发酵合成2-苯乙醇的培养基。

背景技术

2-苯乙醇是一种玫瑰香型的风味物质，世界每年产量约10000吨。能够抑制革兰氏阴性菌、球菌、杆菌以及部分真菌；它还是合成一些高附加值药物比如苯乙醇苷的底物，具有抗菌、抗肿瘤、强心等作用，故 2-苯乙醇在医药卫生领域也有重要应用。在饮料行业，2-苯乙醇是一种重要的食品添加剂，用于调节饮料的风味，除此之外它也是化妆品或者香水中的重要香味物质之一。2-苯乙醇可以在玫瑰花瓣中提取得到，但是成本过高，得率较低，因此目前主要通过化工合成的方式来获得，由于化工合成的过程中会含有苯类以及乙烯类有毒有害物质，添加到食品中会对食品安全造成一定的威胁，因此生物合成2-苯乙醇的方式成为当今研究的热点。

目前发现生物合成2-苯乙醇的方式是利用酿酒酵母的艾里希通路（Ehrlichpathway）通过L-苯丙氨酸生物转化合成2-苯乙醇或者利用碳源从头合成。天然的2-苯乙醇供不应求，开发新的菌种用于生产2-苯乙醇尤为重要。本发明则是一种适用于香灰菌生物发酵合成2-苯乙醇的培养基，香灰菌是银耳的伴生菌，无毒无害，对于食品添加剂而言，安全性是评价食品添加剂质量的重要因素，因此该菌株对食品添加剂天然2-苯乙醇的生产具有很重要的意义，本配方可以提高金鸡岭菌株2-苯乙醇的产量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种适用于香灰菌生物发酵合成2-苯乙醇的培养基。

实现本发明目的的技术解决方案为：

一种适用于香灰菌生物发酵合成2-苯乙醇的培养基，每1000 mL水中含有马铃薯200～800 g，L-苯丙氨酸2～8 g，麦芽糖20～100 g，硫酸镁0.1～0.4 g，pH值自然。

优选的，每1000 mL水中含有马铃薯600 g，L-苯丙氨酸6 g，麦芽糖40g，硫酸镁0.3g，pH值自然。

所述香灰菌为暗色环纹炭团菌（Annulohypoxylon stygium）金鸡岭，已于2020年9月14日在中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏编号为CCTCC NO：M 2020504，地址为武汉大学。

所述香灰菌分离至古田县金鸡岭分离得到的。

其具体实施步骤如下：

（1）培养基制备：按照上述培养基配方称取马铃薯，加水浸提25 min，6层纱布过滤，滤液加入一定比例的麦芽糖、L-苯丙氨酸、硫酸镁混匀充分溶解，高温121℃灭菌20min。

（2）菌种活化：香灰菌菌种在PDA试管培养基上转接活化2次，将香灰菌菌种用接种针挖取约1 cm³的小块接种到含有PDA培养基的培养皿中培养4 d，在培养皿同一半径上用直径0.5 cm的打孔器打孔制备菌种块，接种至含有100 mLPDB培养基的三角瓶中，每瓶接种两块，置于28℃恒温摇床中，以160 r/min的振荡速度培养4d得到活化菌液。

（3）接种：准确量取10 mL菌液接种到含有100 mL上述配方培养基的三角瓶中，至于28℃恒温摇床中，以160 r/min的振荡速度培养6 d，将发酵液4000 r/min离心10 min，取上清液0.22 um尼龙微孔滤膜过滤，滤液即为香灰菌发酵液样品，待上机检测。

（4）检测：采用高效液相色谱法进行香灰菌发酵液样品中2-苯乙醇含量的检测。

本发明的优点：