[发明专利]葡萄耐热相关VvWRKY4蛋白及其编码基因与应用

说明书

本发明公开了葡萄耐热相关VvWRKY4蛋白及其编码基因与应用。VvWRKY4蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。向葡萄41B悬浮细胞中导入VvWRKY4基因，得到转VvWRKY4基因葡萄悬浮细胞。实验证明，在葡萄41B悬浮细胞中过表达VvWRKY4基因可以提高葡萄41B细胞的耐热性；耐热性提高表现在受到高温胁迫恢复后再生能力增加和/或细胞颜色转变为褐色的比例减少。由此可见，VvWRKY4蛋白可以调控葡萄的耐热性，本发明具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及葡萄耐热相关VvWRKY4蛋白及其编码基因与应用。

背景技术

葡萄是世界上广泛栽培的具有重要经济价值的果树。我国是世界上葡萄生产与消费的第一大国，全国各地几乎都有分布。其中，鲜食葡萄占有很大比例。高温是影响葡萄生长发育的重要环境因素，往往抑制光合作用等生理活动，导致浆果产量和品质的下降。近年来，全球气候变化导致高温天气频率和高温程度增加。许多产区中午温度常常达到40℃，有的甚至超过45℃，由此造成巨大的经济损失。因此，通过对葡萄耐热性机制的深入研究，提高葡萄耐热性，对于葡萄的产量和品质具有重要意义。

近些年来，通过GWAS和QTL定位的方法在农作物(如水稻、玉米)中克隆出了许多控制重要农艺性状的基因，这对提高农作物产量和抗逆性具有重要的意义。因此，采用GWAS和QTL定位的方法挖掘葡萄种质资源和杂交群体中的耐热性关键基因将是一种可行途径。

发明内容

本发明的目的是提高葡萄的耐热性。

本发明首先保护来源于葡萄的VvWRKY4蛋白，可为a1)或a2)或a3)或a4)：

a1)氨基酸序列是SEQ ID NO:2所示的蛋白质；

a2)在SEQ ID NO:2所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；

a3)将a1)或a2)所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的、来源于葡萄且与耐热相关的蛋白质；

a4)与SEQ ID NO:2限定的氨基酸序列具有80％或80％以上同源性，来源于葡萄且与耐热相关的蛋白质。

其中，SEQ ID NO:2由502个氨基酸残基组成。

为了使a1)中的蛋白质便于纯化，可在SEQ ID NO:2所示的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1.标签的序列

上述a3)中的蛋白质，所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

上述a3)中的蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

上述a3)中的蛋白质的编码基因可通过将SEQ ID NO:1所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

本发明还保护编码所述VvWRKY4蛋白的核酸分子。

所述编码VvWRKY4蛋白的核酸分子可为b1)或b2)或b3)或b4)所示的DNA分子：

b1)编码区是SEQ ID NO:1所示的DNA分子；

b2)核苷酸序列是SEQ ID NO:1所示的DNA分子；

b3)与b1)或(b2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，来源于葡萄且编码所述VvWRKY4蛋白的DNA分子；