[发明专利]外源基因可控表达的腺相关病毒包装方法

权利要求书

1.一种腺相关病毒包装载体，具有两个ITR片段及插入两个ITR片段之间的基因表达盒；

所述基因表达盒包含顺次连接的启动子、阻遏型操作子以及任选的目的基因；

当有阻遏物存在时，所述阻遏型操作子能够阻遏其下游目的基因的表达。

2.根据权利要求1所述的腺相关病毒包装载体，所述阻遏型操作子选自色氨酸操作子和/或Cumate-CuO可调控系统。

3.根据权利要求2所述的腺相关病毒包装载体，所述氨酸操作子中的TrpO元件在所述基因表达盒的插入位置距离所述启动子的TATA BOX小于等于18个核苷酸。

4.根据权利要求2所述的腺相关病毒包装载体，所述Cumate-CuO可调控系统中的CuO元件的插入位置距离所述启动子的TATA BOX 40～50个核苷酸。

5.根据权利要求1所述的腺相关病毒包装载体，所述启动子为CMV、EF1a、SFH、CAG、CBh、UBC、SFFV、SV40、RSV、mCMV、GAPDH、PGK、CASI、SMVP、GUSB或UCOE。

6.根据权利要求1～5任一项所述的腺相关病毒包装载体，所述阻遏型操作子下游插入有目的基因；

且当所述目的基因表达时会对病毒包装产生负面影响。

7.根据权利要求6所述的腺相关病毒包装载体，所述目的基因对包装细胞产生细胞毒性。

8.根据权利要求7所述的腺相关病毒包装载体，所述目的基因选自自杀基因、细胞凋亡基因和癌基因。

9.根据权利要求6所述的腺相关病毒包装载体，所述目的基因为细胞周期相关基因。

10.根据权利要求6所述的腺相关病毒包装载体，所述目的基因直接抑制病毒的复制和/或组装。

11.根据权利要求6所述的腺相关病毒包装载体，所述目的基因选自GPR78基因、Cdkn1a基因以及APOBEC基因。

12.根据权利要求1～5、7～11任一项所述的腺相关病毒包装载体，所述腺相关病毒包装载体还包含报告基因、增强子、内部核糖体进入位点、终止子和多腺苷酸化信号中的至少一种。

13.腺相关病毒包装载体系统，包含权利要求1～12任一项所述的腺相关病毒包装载体以及携带AAV rep、cap基因的载体。

14.根据权利要求13所述的腺相关病毒包装载体系统，其为AAV1～13中任意一种的腺相关病毒包装载体系统。

15.根据权利要求13或14所述的腺相关病毒包装载体系统，还包含辅助病毒载体。

16.根据权利要求15所述的腺相关病毒包装载体系统，所述辅助病毒载体为腺病毒或疱疹病毒辅助病毒载体。

17.一种腺相关病毒的包装方法，将包含权利要求13～16任一项所述的腺相关病毒包装载体系统转入宿主细胞，并于所述阻遏物存在的前提下进行包装。

18.根据权利要求17所述的腺相关病毒的包装方法，所述宿主细胞为HEK-293细胞或其能够提供腺病毒E1区的衍生株。

19.根据权利要求18所述的腺相关病毒的包装方法，所述衍生株选自HEK-293A、HEK-293S、HEK-293SG、HEK-293SGGD、HEK-293T、HEK-293T/17SF、HEK-293H、HEK-293E、HEK-293-6E、HEK-293F、HEK-293FT、HEK-293FTM、AAV-293以及GP2-293中的至少一种。