[发明专利]用于筛选抗应激胁迫肉羊的血清代谢标志物及其应用

说明书

本发明涉及一种用于抗应激胁迫肉羊的血清代谢标志物及其应用，属于畜牧生产和应用生物技术领域，本发明通过收集抗应激胁迫肉羊和非抗应激胁迫肉羊外周血样本，采用超高效液相色谱‑质谱技术，结合系统的生物信息学分析方法，从而对抗热应激和非抗应激肉羊血清样本中差异代谢物进行筛选。所述标志物为吲哚‑3‑乙酸甲酯，通过所述代谢物标志物以及检测该代谢标志物的试剂，可以筛选耐热肉羊，结果准确客观可靠，且无需提供其他组织样品，为耐热肉羊的筛选奠定基础，具有较好的推广价值。

技术领域

本发明属于畜牧生产和应用生物技术领域，尤其涉及一种用于筛选抗应激胁迫肉羊的血清代谢标志物及筛选方法和应用。

背景技术

羊肉肉质鲜美，具有性温热、补气滋阴、暖中补胃的效能，其营养价值日益受到消费者重视，这使得市场对羊肉的需求量持续增加。

随着羊肉市场需求量的增加以及对生态环境保护的日益重视，肉羊养殖业已由传统的以家庭为单位的散养逐步转化成集约化养殖。我国南方热带和亚热带地区，夏季温度可达38℃以上，且持续时间较长，高温条件下集约化养殖，极易造成肉羊热应激。热应激会降低肉羊干物质采食量、增加呼吸频率和心率、降低瘤胃微生物菌群丰度，最终降低营养物质消化率，影响生产性能，给南方肉羊养殖业带来较大损失。

代谢物是基因表达的终产物。代谢组学是继基因组学、转录组学和蛋白质组学之后新近发展起来的一门学科，它直接将动物体液作为样品进行检测，借助高通量、高灵敏度与高精确度的现代分析技术对内源代谢物进行定量检测，挖掘整体代谢物及代谢物质的变化规律，寻找机体发生的生物学变化与代谢物变化的相对关系，反映机体变化的本质。因此，具有快速、准确、灵敏度高等特点。目前尚无筛选抗应激胁迫肉羊生物标志物的相关报道，且血清的检测是无创的，非侵入的，因此如何通过研究肉羊血清代谢物，筛选抗应激胁迫肉羊生物标志物并加以应用，对解决肉羊应激胁迫，选育耐应激肉羊新品种具有重要意义。

发明内容

本发明旨在于提供一种用于抗应激胁迫肉羊筛选的血清代谢标志物及筛选方法和应用，以提供一种利用血清无创筛选抗应激胁迫肉羊的方法。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的：

本发明提供了一种用于筛选抗应激胁迫肉羊的血清代谢标志物，所述血清代谢标志物为吲哚-3-乙酸甲酯。

本发明还提供了上述血清代谢标志物在筛选抗应激胁迫肉羊中的应用，具体为：通过血清代谢标志物在肉羊血清样本中的浓度判断肉羊的抗热应激性，浓度越低，该肉羊具有抗应激胁迫的能力越大，反之越小。

作为本发明的进一步优化方案，所述抗应激胁迫指的是抗热应激胁迫。

本发明还提供了利用上述血清代谢标志物筛选抗应激胁迫肉羊的方法，步骤包括：

(1)以已知抗应激胁迫肉羊或非抗应激胁迫肉羊血液为标准供试品，以待测肉羊血液作为检测样品，经离心获取血清样本；

(2)检测血清样本中的吲哚-3-乙酸甲酯浓度；

(3)计算标准供试品吲哚-3-乙酸甲酯浓度平均值，作为参考水平，若检测样品相比较参考水平低，则检测样品比标准供试品具有更高的抗应激胁迫能力，反之具有更低的抗应激胁迫能力。

作为本发明的进一步优化方案，所述步骤(2)中，采用超高效液相色谱-质谱联用分析方法检测血清样本中的吲哚-3-乙酸甲酯浓度，步骤包括：

步骤一：血清代谢物的提取

在血清样本中加入3倍体积提取液和内标，混匀后-20℃静置2h，4℃下4000转离心20min，取上清，获得血清代谢物；

步骤二：吲哚-3-乙酸甲酯标准品的制备