[发明专利]通过DNA编码化合物库筛选同时结合多个生物靶标的化合物的方法有效
| 申请号： | 202011426216.6 | 申请日： | 2020-12-09 |
| 公开（公告）号： | CN112941634B | 公开（公告）日： | 2023-09-26 |
| 发明（设计）人： | 李进;窦登峰;巩晓明;万金桥;刘观赛;高森;龚珍;蔡龙英;张雪琴;穆雪梅;张丽芳;刘川;康静文 | 申请（专利权）人： | 成都先导药物开发股份有限公司 |
| 主分类号： | C40B30/04 | 分类号： | C40B30/04 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 610200 四川省成都市双*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 通过 dna 编码 化合物 筛选 同时 结合 生物 靶标 方法 | ||
1.一种通过DNA编码化合物库筛选同时结合多个生物靶标的化合物的方法，包括以下步骤：
a.将n种生物靶标分别用n种不同的互补标签的一方进行标记；
b.将n种带有标签的生物靶标和DNA编码化合物库同时进行孵育；
c.加入第1种互补标签的另一方，除去未结合的分子，从生物靶标上解离得到DNA编码化合物；
d.将解离得到DNA编码化合物替换步骤b中的DNA编码化合物库，将步骤c中第1种互补标签的另一方替换为第2种互补标签的另一方，重复步骤b和步骤c，直至步骤c加入第n种互补标签的另一方；
其中，n为2或3；
所述生物靶标为蛋白；
步骤c和步骤d中加入第1～n种互补标签的另一方后，通过物理、化学或生物的方法除去未结合的分子。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述互补标签的一方为生物素标签、His标签、GST标签、MBP标签、FLAG标签、C-Myc标签、SUMO标签、SNAP标签。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述互补标签的另一方为亲和素、链霉素、镍、谷胱甘肽、多糖树脂、anti-FLAG、anti-C-Myc、SUMO蛋白酶、苯甲基鸟嘌呤(benzylguanine,BG)。
4.一种通过DNA编码化合物库筛选同时结合E3泛素连接酶和靶标蛋白的化合物的方法，包括以下步骤：
a、将E3泛素连接酶用第1种互补标签的一方进行标记，将靶标蛋白用第2种互补标签的一方进行标记，第1种互补标签和第2种互补标签不同；
b、将带有第1种互补标签的一方的E3泛素连接酶和带有第2种互补标签的一方的靶标蛋白与DNA编码化合物库同时进行孵育；
c、加入第1种互补标签的另一方，除去未结合的分子，从生物靶标上解离得到DNA编码化合物；
d、将带有第1种互补标签的一方的E3泛素连接酶和带有第2种互补标签的一方的靶标蛋白与步骤c解离得到DNA编码化合物同时进行孵育；
e、加入第2种互补标签的另一方，除去未结合的分子，从生物靶标上解离得到DNA编码化合物。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：第1种互补标签的一方为His标签，第1种互补标签的另一方为镍。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：第2种互补标签的一方为GST标签，第2种互补标签的另一方为谷胱甘肽。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：第1种互补标签的另一方、第2种互补标签的另一方固定在固相载体上；所述固相载体为磁珠。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤b、步骤d中孵育是在筛选缓冲液中进行，所述筛选缓冲液含有鲑鱼精DNA。
9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤c中加入镍包被磁珠，通过离心除去未结合的分子。
10.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤c、步骤e通过加热从生物靶标上解离得到DNA编码化合物；所述加热温度为85～95℃。
11.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤e中加入谷胱甘肽包被磁珠，通过离心除去未结合的分子。
12.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤e中从生物靶标上解离得到DNA编码化合物后对DNA分子数进行qPCR定量。
13.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：对步骤e中解离得到DNA编码化合物进行测序，将测序结果解码，得到富集信号。
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