[发明专利]一种脐带血造血干细胞的分离方法

权利要求书

1.一种脐带血造血干细胞的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：

将6%的羟乙基淀粉溶液加入脐血中混匀，其中羟乙基淀粉溶液与脐血的体积比为4:1；

混匀后分装至离心管中，静置，然后离心得到上层液体和下层红细胞；

将上层液体和下层红细胞分别离心，上层液体离心后得到上层血浆和底层细胞，底层细胞用上层血浆重悬；

红细胞离心后得到表面白膜层，表面白膜层用上层血浆定容，然后离心得到的下层细胞沉淀去除红细胞后用上层血浆重悬；

将步骤3）和4）中重悬后的细胞汇集在一起，加入上层血浆定容，再加入冻存液，混合均匀后一起转移至冻存袋中；

使用程控降温机降温，然后转入液氮罐保存。

2.根据权利要求1所述的一种脐带血造血干细胞的分离方法，其特征在于，所述步骤2）中离心管为50mL，离心力为50g，离心时间为10min。

3.根据权利要求1所述的一种脐带血造血干细胞的分离方法，其特征在于，所述步骤2）中离心后分离的操作为：先用电动移液枪装上10ml移液管轻轻吸取离心管上层液体，最后0.5ml上层液体用1ml手动移液器轻轻吸取，尽量将白膜层吸干净并尽量少吸取下层红细胞。

4.根据权利要求1所述的一种脐带血造血干细胞的分离方法，其特征在于，所述步骤3）中上层液体和下层红细胞离心的离心力为747g，离心时间10min。

5.根据权利要求1-4任一项所述的一种脐带血造血干细胞的分离方法，其特征在于，所述步骤4）中表面白膜层用上层血浆定容至30mL，离心力为747g，离心时间10min。

6.根据权利要求1-4任一项所述的一种脐带血造血干细胞的分离方法，其特征在于，所述步骤5）中加入上层血浆定容至20mL。

7.根据权利要求1-4任一项所述的一种脐带血造血干细胞的分离方法，其特征在于，所述步骤5）中冻存液的制备方法为：右旋糖酐和二甲基亚砜（DMSO）以 1 ：1 比例混合，先加右旋糖酐后加DMSO，预冷后得到。

8.根据权利要求1-4任一项所述的一种脐带血造血干细胞的分离方法，其特征在于，所述步骤6）中在液氮罐保存的温度为－196℃。