[发明专利]一种榛属植物品种SSR分子标记指纹图谱的构建方法

说明书

本发明公开了一种榛属植物品种SSR分子标记指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：(1)提取参选品种的榛属植物DNA；(2)使用25对核心SSR分子标记引物分别对待测品种进行多重PCR扩增，(3)将步骤(2)的扩增产物进行分组，然后按组混合进行毛细管电泳检测；(4)对检测结果进行数据分析构建出指纹图谱。本发明中核心引物多态性强、数据读取简易，兼容榛属植物各个种，具有强大的辨别功能；通过引物混合PCR技术，一次PCR可获得2组引物的产物，节约1倍的PCR成本；通过PCR产物混合毛细管电泳技术，一次电泳可同时获得4‑8组引物的数据信息，节约3‑7倍的毛细管电泳费用，从而实现了对实验操作节约成本、经济快捷的目的。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种榛属植物品种SSR分钟标记指纹图谱的构建方法。

背景技术

榛属(Corylus)植物属于桦木科(Betulaceae)榛族，在世界范围内被广泛认可的有13 个野生种，广泛栽培的榛子品种为欧洲榛(C.avellana L.)及其与大果榛(C.maximaMill.) 的杂交后代，主要品种有：‘Tombul’(土耳其)，‘TGDL’(意大利)，‘Barcelona’(美国)，‘Jefferson’(美国)，等。

中国原产榛属植物有8个种和2个变种，其中90％以上是野生平榛(C.heterophyllaFisch.)。主要栽培的是平欧杂种榛和少量园艺化栽培的平榛。平欧杂种榛(CorylusheterophyllaFisch.×Corylusavellana L.)是20世纪80年代国内专家利用我国平榛和国外欧洲榛种间杂交获得的杂交后代，迄今近40年来，先后审定和筛选了10余个品种和 30余个优良品系，具有果大、丰产、出仁率高、果仁饱满、适应性强等特点，被广泛引种至全国各地，目前，全国栽培面积近120万亩。

随着平欧杂种榛产业的迅速发展，在科研和产业方面存在一些问题亟待解决：首先，现有平欧杂种榛品种(品系)筛选自多个母本和父本的混合后代群体，品种(品系)间的亲缘关系非常复杂，有些品种(品系)难以区分；第二，杂交育种是榛子种质创新的主要手段，各单位的杂交育种工作一直持续进行，候选群体的亲子鉴定工作亟待开展；第三，目前各单位陆续开始审定新品种，新品种的鉴定工作急需精准快捷的技术；第四，生产上平欧杂种榛苗木的品种混杂和同物异名问题尤为普遍，混杂品种或适应性较差，或与授粉品种不亲和，均导致了种植者蒙受巨大的经济损失。

因此，急需简单、精准、快捷的品种鉴定技术应用到榛属品种生产和科研上来。

表观性状鉴定技术被很多基层单位和种植户所采用，依靠坚果外观结合树体性状进行辨别，如坚果大小、性状、颜色、外观条纹；种仁形状、颜色、脱皮性；树势、枝干开张角度、分枝特性；枝条颜色、皮孔、茸毛；叶片大小、形状、颜色；果苞长短、形状、开张情况；叶芽形状、颜色、鳞片；雌花颜色、雌蕊数量；雄花序葇荑花序数、形状、颜色等。表观性状鉴定法鉴别品种周期长且季节性强，而且受栽培因素的影响，不同地区的树体发育和坚果外观存在一定差异，从而影响了对表型性状的判断。

分子标记技术具有准确、高效、重复性强的优点，是研究植物遗传多样性、亲缘关系和品种鉴定最常用的方法，国内学者先后采用RAPD、ISSR和AFLP技术在平欧杂种榛品种(品系)的遗传关系方面进行过研究，报道了平欧杂种榛群体的遗传多样性。

RAPD技术：刘振盼等利用RAPD标记技术，对辽宁8个杂交榛子主栽品种进行指纹分析。从60个10碱基随机引物中筛选重复性好的3个引物OPF05、OPG01、OPH07，选取7 个条带作为品种鉴别的RAPD标记，以此构建榛子优良品种的指纹图谱。