[发明专利]一株高产耐热碱性纤维素酶的菌株及生产方法

权利要求书

1.一株高产耐热碱性纤维素酶的芽孢杆菌，其特征在于，所述菌株具体为芽孢杆菌(Bacillus sp.)AC-77，保藏编号为CGMCC No.20674。

2.权利要求1所述芽孢杆菌(Bacillus sp.)AC-77在生产碱性纤维素酶中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，摇瓶发酵生产碱性纤维素酶的方法具体如下：

将种子液按2％-5％接种量转接至摇瓶发酵培养基中，36℃-37℃，摇床转速200-220r/min条件下培养48-54h。将发酵液在4-6℃、8000-9000r/min条件下离心10-15min，收集上清液即得到碱性纤维素酶粗酶液。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，摇瓶发酵培养基组成：CMC-Na 8.5-11.5g/L，豆饼粉18.0-21.0g/L，淀粉9.0-10.5g/L，NaCl 4.0-5.5g/L，KH₂PO₄0.8-1.1g/L，Na₂CO₃9.0-12.0g/L，其余为水，pH7.5-8.0，121℃灭菌20min。

5.如权利要求2所述的应用，其特征在于，发酵罐发酵生产碱性纤维素酶的方法具体如下：将种子液按照8％-10％的接种量接入到发酵罐培养基中，36℃-37℃培养，罐压0.05-0.08Mpa，搅拌转速300-800r/min，当溶氧降至最低再回升至20％时，开始补料，控制溶氧在20％-30％之间；发酵过程通过协调补加补料培养基、液氨、磷酸来控制发酵液pH，使其维持在7.5-8.0范围内，培养至酶活增长缓慢或不再增长，菌体开始部分自溶时放罐。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，发酵罐培养基组成如下：豆饼粉18.0-25.0g/L，淀粉9.0-10.0g/L，麸皮9.0-10.0g/L，NaCl 4.0-6.0g/L，MgSO₄0.4-0.5g/L，KH₂PO₄ 0.4-0.5g/L，FeSO₄ 0.01-0.02g/L，pH7.5-8.0；

补料培养基组成如下：豆饼粉25.0-35.0g/L，淀粉液化液120-140g/L，KH₂PO₄0.4-0.5g/L，pH7.5-8.0。

7.如权利要求3-6任意一项所述的应用，其特征在于，纤维素酶的提取与精制工艺如下：收集放罐后的发酵液，加入0.2％-0.3％的防腐剂、3-5％磷酸氢二钠和1-3％％氯化钙进行絮凝，再加入2-4％珍珠岩助滤剂，板框压滤后得到澄清酶液；用10000分子量超滤膜对所述澄清酶液进行超滤，得到超滤液；在所述超滤液中加入质量百分比40％稳定剂、0.5％防腐剂和5％氯化钠，完全溶解后调节pH值至8.0，然后用硅藻土精滤除菌，即得到碱性纤维素酶液体酶制剂。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述稳定剂为质量比2:1:1的葡萄糖、甘油和山梨醇，所述防腐剂为质量比为1:1的山梨酸钾和苯甲酸钠。

9.由权利要求3-8任意一项制备的纤维素酶。