[发明专利]一种Megasphaera属的细菌MNC-992及其培养方法和应用

说明书

本发明涉及微生物技术领域，公开一种Megasphaera属的细菌MNC‑992及其培养方法和应用，所述细菌MNC‑992于2020年9月29日保藏于广东省微生物菌种保藏中心（GDMCC），保藏编号为GDMCC No.61224。所述细菌MNC‑992的16S核糖体RNA序列如SEQ ID No.1所示。本发明的细菌MNC‑992在pH为3.0的模拟胃液中可以至少正常存活2小时，口服细菌MNC‑992用于预防和治疗肿瘤：能够明显降低结直肠癌的生长速度、明显降低肝癌的生长速度、明显降低结乳腺癌的生长速度。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体地说是一种Megasphaera属的细菌MNC-992及其培养方法和应用。

背景技术

近年来的研究表明，癌症病人肠道微生物组对肿瘤免疫治疗的效果有重要影响，调节和利用肠道微生也成为肿瘤免疫治疗的关键组成部分。肠道微生物和免疫细胞之间直接相互作用的多种机制已得到证实，肠道淋巴组织中的树突状细胞和巨噬细胞是免疫调节微生物的关键靶细胞。特别是在小肠中，由于肠道表面积大，黏液层薄而弥散，使得微生物可以与免疫细胞紧密接触。微生物菌群中的不同的特异菌株能够抑制或激活整个身体的免疫反应。

以活细菌为基础的活体生态药(Live Biotherapeutic Product)的开发在近年来获得了越来越多的关注。细菌在进入消化道后会面临相当恶劣的生存环境，胃部的低pH的胃酸以及肠道中一定浓度的胆盐对许多细菌有着很大的伤害。一个细菌对消化道环境的耐受性对其是否有机会被开发成活体生态药关系重大，这些指标对以该细菌菌株为基础进行活体生态药开发中的剂型选择又至为重要。

因此，亟需开发一种可以口服用于肿瘤的预防和治疗的细菌。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种Megasphaera属的细菌MNC-992及其培养方法和应用。

本发明为实现上述目的，采取以下技术方案予以实现：

一种Megasphaera属的细菌MNC-992，所述细菌MNC-992于2020年9月29日保藏于广东省微生物菌种保藏中心（GDMCC），保藏编号为GDMCC No. 61224。

优选地，所述细菌MNC-992的16S核糖体RNA序列如SEQ ID No.1所示。

优选地，其具备对四环素类抗生素的耐药性。

优选地，其在低至3.0的pH下正常存活的能力。

本发明的另一目的在于公开上述细菌MNC-992的培养方法：利用AC液体培养基

培养所述细菌MNC-992；所述AC液体培养基中每升含：蛋白胨20 g、葡萄糖5 g、酵母粉3 g、牛肉膏3 g、维生素C 0.2 g；所述AC液体培养基pH为7.0。

优选地，所述培养方法具体包括以下步骤：

（1）用灭菌牙签从细菌MNC-992本身分裂繁殖的众多单菌落中挑取一个单克隆到10 ml 的所述AC液体培养基中培养1天；

（2）取1 ml培养物进行16S RNA鉴定，经与SEQ ID No.1所示序列比对鉴定结果正确后，吸取2 ml菌悬液转接入80 ml AC液体培养基中于厌氧操作台培养；培养24小时后，吸取30 ml 菌悬液转接入400 ml AC液体培养基中于厌氧操作台培养；培养24小时后，取1 ml菌液进行 16S RNA鉴定，经与SEQ ID No.1所示序列比对鉴定结果正确后，将全部菌液转移到1 L离心瓶中，在6000 rpm，4 ℃条件下离心30 min；

（3）取沉淀用AC液体培养基和无菌甘油的混合液重悬，即为菌液甘油混合液，其中AC液体培养基和无菌甘油的体积比为4:1；将菌液甘油混合液分装于无菌冻存管中，冷冻于-80 ℃保存。