[发明专利]一种用于核酸疫苗递载的脂质体-聚合物杂化纳米颗粒

说明书

一种用于核酸疫苗递载的脂质体‑聚合物杂化纳米颗粒，以可生物降解的聚合物mPEG‑PLGA封装pcDNA3.1‑MEG或pSFV‑MEG，形成纳米颗粒核心，以亲水表面活性剂PEG‑DSPE2000‑Mal作为纳米颗粒的壳，核壳交接处设置一层脂质体单层(Lecithin)。本发明使DNA疫苗转染效率高，包封率高,可保护核酸疫苗短期内不被快速降解，并可缓慢释放核酸，从而实现抗原的持续表达，提高其在体内的循环和作用时间，增强抗原对机体的持续性免疫刺激，增强免疫效果。

技术领域

本发明涉及DNA疫苗递载和保护技术领域，具体涉及一种用于核酸疫苗递载的脂质体-聚合物杂化纳米颗粒。

背景技术

20世纪90年代，首次证明编码来自病原体抗原的DNA质粒可以诱导产生抗原特异性抗体和T细胞免疫应答。从那时起，诸多研究者在临床前和临床上进行了广泛的关于DNA疫苗的相关研究。目前，DNA 疫苗已被许可用于治疗马的西尼罗河病毒(7种)、鲑鱼的造血坏死病毒(8种)、狗的黑色素瘤(9种)等；证明DNA疫苗可以在较大的动物中引发保护性免疫。

传统的减毒和灭活疫苗无法提供终生免疫力，并且具有逆转毒性的风险；蛋白疫苗具有触发针对多种微生物感染的强大体液免疫反应的能力，但它们不足以诱导T细胞介导的免疫反应，从而限制了其在癌症和慢性病毒感染(如HIV)中的应用。此外，RNA和蛋白质疫苗还至少存在如下缺陷：mRNA疫苗被证明具有肝毒性、蛋白质和RNA 疫苗生产过程复杂、蛋白对冷链要求严格等。与RNA和蛋白质疫苗相比，DNA疫苗似乎能够刺激性更强细胞反应；具有更高的安全性和稳定性；易于在短时间内大规模生产；且无需冷链即可保存。最重要的是，它具有通用性，mRNA和蛋白均是其下游产物，可直接在免疫个体中生产。

遗憾的是，由于DNase降解和网状内皮系统(RES)的去除作用，裸露的DNA在体内的半衰期仅为几分钟；因此，DNA疫苗在人体中显示出相对较差的免疫原性。研究发现：合理设计多表位DNA疫苗，使其包含最佳的B-和T-(HTL和CTL)细胞表位，可以刺激强大的体液和细胞免疫反应。

同时，在真核生物中具有自我复制能力的复制子DNA疫苗被认为是有前途的疫苗形式。通过使用更强的载体启动子、优化密码子以及添加合适的前导和尾部序列，都可以提高DNA疫苗的免疫反应。

纳米载体，通常包括聚合物(聚合物纳米颗粒和聚合物胶束)、脂质(脂质体和固体脂质纳米颗粒)和金属(金和二氧化硅)，被广泛使用用于药物输送以保护其免受酶和其他恶劣条件的降解。其中，聚合物纳米颗粒和脂质体应用潜力最大；聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA) 是目前应用最广泛且经FDA批准的药物输送聚合物材料之一；其具有生物降解性、生物相容性和可调节性。然而，在制备过程中，使用有毒有机溶剂以及亲水性药物的低封装效率限制了PLGA的使用。尽管聚乙二醇化的PLGA(mPEG-PLGA)可以改善其体内循环时间，但很容易在血液中清除。

与其他脂质体相比，卵磷脂是一种从大豆中提取的天然无毒脂质体。但是，脂质很容易被RES去除。并且缺乏结构完整性。脂质体- 聚合物杂化纳米颗粒(LPNs)作为具有无毒，良好的生物相容性和生物降解优势的新一代递送载体，适用于许多生物医学应用。LNPs递送系统不仅具有良好的结构完整性、生物相容性和稳定性；而且还可以使载药缓慢释放，并保护药物免受酶的降解。

综上，业内亟需这样的DNA疫苗：具有较高的免疫原性，且不会很快被核酸酶降解，从而可长时间在机体内停留，进而发挥免疫应答作用。

发明内容

本发明的目的是针对现有的技术存在的不足，提出了一种用于核酸疫苗递载的脂质体-聚合物杂化纳米颗粒，DNA疫苗为MEG，

1)序列表中的氨基酸序列SEQ ID NO：1；

2)序列表中的氨基酸序列SEQ ID NO：2；

3)序列表中的氨基酸序列SEQ ID NO：3；