[发明专利]一种检测HLA-B*15:02等位基因的荧光PCR方法及特异性引物探针组合

权利要求书

1.一种针对HLA-B*15:02等位基因的特异性引物探针组合，其特征在于，包括：

HLA-B*15:02等位基因特异性上游引物Fm:5’-CCTCATTACTGGGAAGCAGCATCAT-3’；

非HLA-B*15:02等位基因特异性上游引物Fn1:5’-CCTCATTACTGGGAAGCAGCATCAA-3’；

非HLA-B*15:02等位基因特异性上游引物Fn2:5’-CCTCATTACTGGGAAGCAGCATGAA-3’；

下游引物R:5’-CCACAACCATCAAGGCGATACATCT-3’；

探针P：5’-ROX-ACGCAGCCTGGGACCCTGTGTGCCAGCA-BHQ1-3’；

其中，ROX为荧光基团，BHQ1为淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的特异性引物探针组合，其特征在于，还包括针对内参基因β-Actin所设计的特异性引物和探针，具体如下：

上游引物ACTB-F:5’-CTCTCTGACTAGGTGTCTAAGACA-3’；

下游引物ACTB-R:5’-GAGTCTGTTCAGACCTACTGTG-3’；

探针ACTB-P:5’-FAM-AGGTACTAACACTGGCTCGTGTGAC–BHQ1-3’；

其中，FAM为荧光基团，BHQ1为淬灭基团。

3.权利要求1或2所述特异性引物探针组合在制备基于荧光PCR反应检测HLA-B*15:02等位基因的检测工具的用途。

4.根据权利要求3所述的用途，所述检测工具为试剂盒或芯片。

5.一种基于荧光PCR反应检测HLA-B*15:02等位基因的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1或2所述的特异性引物探针组合。

6.一种检测HLA-B*15:02等位基因的TaqMan探针实时荧光PCR方法，用于非疾病诊断目的，其特征在于，包括以下步骤：

1)获取待测样本基因组DNA；

2)在针对HLA-B*15:02等位基因阳性与针对HLA-B*15:02等位基因阴性反应体系中分别按配比加入所述待测样本基因组DNA、权利要求1或2所述的特异性引物探针组合、以及PCR相关反应试剂；

3)通过荧光PCR检测，采集ROX与FAM荧光通道的荧光信号；

4)通过荧光信号结果分析判断待测样本携带HLA-B*15:02等位基因的情况。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR相关反应试剂包括dNTP、Taq DNA聚合酶、PCR反应缓冲液和用于补充体系的双蒸水。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，以反应体系为20μL计，则包括：

管1:：5xbuffer 4μL、10xbuffer 2μL、dNTP 2μL、上游引物Fm0.4μL、下游引物R 0.4μL、探针P 0.2μL、内参上游引物0.2μL、内参下游引物0.2μL、内参探针0.1μL、Taq DNA聚合酶0.2μL、待测样本基因组DNA 2μL，用双蒸水将体积补足至20μL；

管2：5xbuffer 4μL、10xbuffer 2μL、dNTP 2μL、上游引物Fn1 0.2μL、上游引物Fn2 0.2μL下游引物R 0.4μL、探针P 0.2μL、内参上游引物0.2μL、内参下游引物0.2μL、内参探针0.1μL、Taq DNA聚合酶0.2μL、待测样本基因组DNA 2μL，用双蒸水将体积补足至20μL；

其中，5xbuffer、10xbuffer、Taq DNA聚合酶来自菲鹏生物股份有限公司的产品Hotstart HiTaq DNA Polymerase。