[发明专利]一种检测混合体系内目标分子浓度的方法及试剂盒

说明书

本发明涉及一种定量检测目标分子X浓度的方法，其包括：向包括有所述目标分子X的反应系统中添加报告分子A并持续至少第一给定时间，其中所述报告分子A与目标分子X之间有特异结合活性；向所述反应系统中添加竞争分子B，所述竞争分子B与所述报告分子A之间具有特异结合活性而与所述目标分子X不具有任何结合活性，当不存在目标分子X时，所述竞争分子B与所述报告分子A结合时发出给定强度的荧光强度L₀；将体系混匀并等待至少第二给定时间后检测所述系统的荧光强度L；在理想浓度范围内，目标分子X的浓度可以与L₀‑L值建立线性关系；以上述建立的线性关系作为标准曲线，可以由实际测得的荧光强度变化值L₀‑L推算出目标分子X的浓度。本发明还涉及与上述方法搭配的试剂盒。

技术领域

本发明涉及化学分析技术领域，具体涉及一种检测混合体系内目标分子浓度的方法及试剂盒。

背景技术

物质浓度的检测在化工，生物医药，医学等领域应用广泛。20世纪90 年代新兴并发展的有关核酸适配体的研究更加促使了这一领域的发展。核酸适配体是一小段经体外筛选得到的寡核苷酸序列或者短的多肽，能与相应的配体进行高亲和力和强特异性的结合，它的出现为化学生物学界和生物医学界提供了一种新的高效快速识别的研究平台，并在许多方面展示了良好的应用前景。

传统的用核酸适配体对目标分子浓度的检测方法大多需要牵涉到G4 联体显色，荧光能量共振转移，复杂的引物探针设计以及较为繁琐的实验过程。这就导致各个检测方法无法在时间，成本，特异性，灵敏度，简单性上达到很好的统一。

Cas12a蛋白与crRNA复合物可以对某一特定序列的DNA单链进行识别并结合，之后展现出惊人的反式切割活性(trans-cleavage)。因此Cas12a 结合体系中的单链DNA荧光报告分子被用于对DNA检测的研究中。近期，张立新和谭高翼团队开发了“猫鼻子”方法，利用小分子别构蛋白在特定小分子存在时释放出DNA的特点，结合Cas12a进行目标分子的检测。但是该方法只能对拥有对应别构蛋白的小分子进行检测，局限性很大。

发明内容

因此，本申请开发了一种针对目标分子的结合适配体和CRISPR技术的检测方法，其命名为Molecular radar(random Molecular aptamer-dependent CRISPR-assistreporter)。该方法可在0.5h之内对任意小分子进行定量检测。

本申请的技术方案提供了：

1.一种定量检测目标分子X浓度的方法，其包括：

向包括有所述目标分子X的反应系统中添加报告分子A并等待至少第一给定时间，其中所述报告分子A与目标分子X之间有特异结合活性；

向所述反应系统中添加竞争分子B，所述竞争分子B与所述报告分子A 之间具有特异结合活性而与所述目标分子X不具有任何结合活性，当不存在目标分子X时，所述竞争分子B与所述报告分子A结合时发出给定强度的荧光强度L₀；

将体系混匀并等待至少第二给定时间后检测所述系统的荧光强度L；

在理想浓度范围内，目标分子X的浓度可以与L₀-L值建立线性关系；

以上述建立的线性关系作为标准曲线，可以由实际测得的荧光强度变化值L₀-L推算出目标分子X的浓度。

2.根据项1所述的方法，其中，所述目标分子X是任意的适合筛选核酸适配体的分子。