[发明专利]同时测定人血浆中培哚普利和培哚普利拉浓度的方法

说明书

本发明属于医药检测技术领域，公开一种同时测定人血浆中培哚普利和培哚普利拉浓度的方法，分别称取培哚普利叔丁铵盐和培哚普利拉分别经甲醇和DMSO溶解配制成标准对照品储备液；用乙腈水溶液稀释配制成培哚普利和培哚普利拉工作溶液；取培哚普利和培哚普利拉工作溶液混合配制成混合标准曲线工作溶液；取混合标准曲线工作溶液稀释到空白血浆中，配制成标准曲线血浆样品；往样品孔依次加入沉淀剂、混合内标工作溶液、标准曲线血浆样品，涡旋离心，进样LC‑MS/MS系统，得到色谱图。本发明解决了血浆基质干扰多的问题，灵敏度高，可确保不同基质来源的血浆样品均在同一响应水平，检测结果不受基质影响，结果准确可靠。

技术领域

本发明涉及医药检测技术领域，具体涉及一种同时测定人血浆中培哚普利和培哚普利拉浓度的方法。

背景技术

培哚普利(Perindopril)主要用于治疗原发性高血压与心力衰竭，是法国施维雅公司于上世纪八十年代研制开发的一个不含巯基的血管紧张素转化酶(Angiotensionconverting enzyme,ACE)抑制剂，是当前国际上血管紧张素转化酶抑制剂类(ACEIs)抗高血压药物中临床疗效佳、安全性高、副作用小的一种手性药物，而且作用时间长，耐受性好，具有良好的市场前景。培哚普利拉为培哚普利的代谢物，在化学性质和物理性质方面与裴多普利有所不同，为了确保二者在血浆中所占浓度的情况，在检测过程中需要对检测方法进行合理的调整和匹配。

现有的检测方法中，主要以蛋白沉淀法对血浆进行预处理，存在血浆杂质中的磷脂无法有效去除的情况，检测过程中基质效应难以避免，影响分析物的定量。现有的培哚普利有关物质分析方法，如文献(中国新药杂志，2008年第17卷第21期，第1860-1864页，葛萍等，液相色谱-串联质谱法测定人血浆中培哚普利及其活性代谢物培哚普利拉)中，采用蛋白沉淀法测定血浆中培哚普利及培哚普利拉的浓度，采用Phenomenex Cu-串联质谱，以选择反应检测正离子方式进行检测，但是该方法具有明显的基质效应且不同浓度的基质效应水平不一致，在实际运用过程中存在局限性。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种同时测定人血浆中培哚普利和培哚普利拉浓度的方法，采用LC-MS/MS法同时测定人血浆中培哚普利和培哚普利拉浓度，通过优化液相条件不仅实现培哚普利和培哚普利拉的有效分离，且解决了血浆基质效应的问题，能够保证不同基质来源的血浆样品均在同一响应水平，检测灵敏度高，结果准确可靠。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一方面，本发明提供一种同时测定人血浆中培哚普利和培哚普利拉浓度的方法，包括如下步骤：

1)标准系列工作溶液的配制：称取培哚普利叔丁铵盐和培哚普利拉分别于容量瓶中，分别经甲醇和DMSO溶解配制成标准对照品储备液；将标准对照品储备液用50％乙腈水溶液稀释，分别配制成标准系列的培哚普利工作溶液和培哚普利拉工作溶液；取等体积的标准系列的培哚普利工作溶液和培哚普利拉工作溶液混合配制成混合标准曲线工作溶液；

2)标准曲线血浆样本的制备：取标准系列的混合标准曲线工作溶液，稀释到空白血浆中，配制成系列浓度的标准曲线血浆样品；

3)标准曲线回归方程的绘制：往样品孔加入沉淀剂后，加入混合内标工作溶液、标准曲线血浆样品，涡旋，离心后，进样LC-MS/MS系统，得到色谱图；根据得到的色谱图中培哚普利色谱峰面积与内标峰面积的比值计算培哚普利在血浆中的浓度，制定培哚普利标准曲线回归方程；根据得到的色谱图中培哚普利拉色谱峰面积与内标峰面积的比值计算培哚普利拉在血浆中的浓度，制定培哚普利拉标准曲线回归方程。

进一步地，所述标准对照品储备液的浓度为1mg·mL^-1；所述沉淀剂为3％HClO₄溶液。