[发明专利]一种基于点亮型RNA适体的CRISPR-Cas13核酸检测试剂盒

权利要求书

1.一种基于点亮型RNA适体的CRISPR-Cas13核酸检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：

（1）点亮型RNA适体或其DNA模板；所述点亮型RNA适体为Broccoli；

（2）Cas13蛋白；

（3）crRNA或其DNA模板；

（4）核酸染料；所述核酸染料为DFHBI-1T；

当试剂盒包括第（1）和/或第（3）项的DNA模板时，使用前需要将DNA模板转录成RNA；

所述点亮型RNA适体可特异性结合核酸染料并使其发射荧光，点亮型RNA适体如果被Cas13蛋白剪切，将无法与核酸染料结合，则荧光淬灭；

所述crRNA能与Cas13结合后形成Cas13-crRNA复合物，且形成Cas13-crRNA复合物后，在crRNA的向导序列与靶标RNA形成双链的情况下能激活Cas13蛋白的酶切活性；

所述试剂盒是检测蜡样芽孢杆菌RNA的试剂盒，其crRNA的序列如SEQ ID NO.1所示；

或，所述试剂盒是检测沙门氏菌RNA的试剂盒，其crRNA的序列如SEQ ID NO.2所示；

或，所述试剂盒是检测大肠杆菌RNA的试剂盒，其crRNA的序列如SEQ ID NO.3所示。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述crRNA的锚定序列如SEQ ID NO.13所示。

3.一种定性检测RNA样本中靶标RNA的方法，其特征在于：所述方法为非诊断和治疗目的，该方法包括如下步骤：

1）在RNA样本中加入权利要求1或2所述试剂盒的点亮型RNA适体、核酸染料，检测荧光；

2）加入权利要求1或2所述试剂盒的crRNA和Cas13蛋白的混合物；

3）检测荧光；

当步骤3）检测的荧光明显弱于步骤1）的荧光，则表示检测到了靶标RNA。

4.一种检测RNA样本中靶标RNA的含量的方法，其特征在于：所述方法为非诊断和治疗目的，该方法包括如下步骤：

1）准备靶标RNA的标准品；

2）向标准品加入权利要求1 或2所述试剂盒的点亮型RNA适体、crRNA和核酸染料、Cas13蛋白，在核酸染料的激发光下检测荧光，绘制标准曲线；

3）向RNA样本中加入权利要求1或2所述试剂盒的点亮型RNA适体、crRNA和核酸染料、Cas13蛋白，在核酸染料的激发光下检测荧光，代入标准曲线，得到靶标RNA浓度。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：所述crRNA与Cas13的摩尔比为（1:0.25）~（1：2）。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述crRNA与Cas13的摩尔比为（1:0.25）~（1：1）。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述crRNA与Cas13的摩尔比为1:1。