[发明专利]一种猫须草无菌短枝快速繁殖的方法

权利要求书

1.一种猫须草无菌短枝快速繁殖的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

步骤一，猫须草预处理培育：

S1：选取健壮无病虫害的猫须草，小心挖起，抖掉根部的土壤并用清水冲洗，在枝条离地面3～4cm处修剪及剪去老叶保留叶柄，将修剪好的枝条用浓度为0.4％的咪酰胺或者浓度为0.2％的代森锰锌药液浸泡消毒1～2h；

S2：浸泡后移栽到，装有用50％水溶代森铵350倍液消毒过后的培育基质的花盆内，并移入可密闭塑料大棚中；

S3：移栽苗定植后，每隔7天交替使用浓度为0.4％的咪酰胺和浓度为0.2％的代森锰锌的混合液，或者单用浓度为0.4％的咪酰胺，或者单用浓度为0.2％的代森锰锌药液喷洒苗植株、地面以及塑料大棚四周一次；当猫须草顶部新抽出幼嫩芽段时，将其从基部剪断，作为无菌短枝快速繁殖用的外植体；

步骤二，外植体的清洁：将通过猫须草预处理培育得到的外植体带回实验室，剪去叶片，清水冲洗一遍，剪成2～3cm带有一对腋芽的茎段，用洗洁精溶液浸泡5分钟，流水冲洗20min，控干水分后装入灭菌后的空瓶中，放入超净工作台，备用；

步骤三，外植体的消毒：在超净工作台中，将外植体转移至新的灭菌后的空瓶中，倒入75％酒精浸泡外植体10～20s，用灭菌水冲洗一次，用0.1％升汞溶液浸泡4～8min，期间不断摇动，用灭菌水冲洗6～8次，用灭菌纸吸干后接种；

步骤四，初代培养：在超净工作台中将消毒好的外植体用接种刀切掉外部边缘部分，用镊子将带有一对腋芽的无菌短枝茎段按极性接种于装有初代培养基的接种盘中，于培养室中培养15～30天；即可长成2～5cm的组培苗；初代培养选用MS基本培养基附加6-BA 0.5～2.0mg/L、NAA0.1～1.0mg/L、蔗糖20～30g/L、琼脂7g/L；调节pH至5.8～6.0；

步骤五，继代培养：将步骤四中得到的初代培养组培苗再剪成带有一对腋芽的无菌短枝茎段，按极性接种于装有继代培养基的接种盘中，于培养室中培养15～30天；即可长成2～5cm的组培苗；继代培养基选用MS基本培养基附加TDZ 0.01～0.1mg/L、IBA0.1～1.0mg/L、蔗糖20～30g/L、琼脂7g/L；调节pH至5.8～6.0；

步骤六，生根培养：将步骤五中的继代培养组培苗从基部剪下，置于生根培养基中，于培养室中培养15～30天；即可根长度达4～6cm，根须为白色；生根培养基以1/2MS为基本培养基，附加NAA 0.5～2.0mg/L、IBA 0.5～2.0mg/L、活性炭2～3g/L，蔗糖20～30g/L、琼脂7g/L；调节pH至5.8～6.0；

步骤七，组培苗练苗移栽：待生根培养基质中的小苗长到3～5cm高，根条数达6～10条时，将其移到塑料大棚中，自然光下练苗7～10天；后将其从培养瓶中取出，洗净其底部培养基，置于多菌灵溶液中浸泡5～7min，移栽入已消毒培育基质中，长出猫须草新叶即表示移栽成活。

2.根据权利要求1所述的一种猫须草无菌短枝快速繁殖的方法，其特征在于，所述步骤一中的S2所述的可密闭塑料大棚在移入前，用0.4％的咪酰胺和0.2％的代森锰锌消毒地面和四周。

3.根据权利要求1所述的一种猫须草无菌短枝快速繁殖的方法，其特征在于，步骤二中的S3中当猫须草顶部新抽出幼嫩芽段生长至8～10cm时，于晴天下午两点钟将其从基部剪断，作为无菌短枝快速繁殖用的外植体。

4.根据权利要求1所述的一种猫须草无菌短枝快速繁殖的方法，其特征在于，所述无菌短枝茎段每瓶接种1～2个，每个无菌短枝茎段带有一对腋芽。

5.根据权利要求1所述的一种猫须草无菌短枝快速繁殖的方法，其特征在于，所述步骤四、步骤五和步骤六中培养条件，均为培养温度为23～28℃，光照强度为2000～2500lx。

6.根据权利要求1所述的一种猫须草无菌短枝快速繁殖的方法，其特征在于，所述步骤一和步骤七中的培育基质由体积比为1：1：1的珍珠岩、细河沙和泥炭土组成，其消毒方式为：用50％水溶代森铵350倍液，按每平方米培育基质用3公斤稀释液均匀喷洒。

7.根据权利要求1所述的一种猫须草无菌短枝快速繁殖的方法，其特征在于，所述75％酒精和0.1％升汞在接种前一天配置；所述无菌水、无菌纸、接种盘、空瓶、镊子、接种刀在121℃下灭菌35min，所述培育基质的灭菌在121℃下灭菌18min。