[发明专利]一种磁珠法快速核酸提取试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种磁珠法快速核酸提取试剂盒，所述试剂盒由飞磁裂解液、磁珠悬浮液、飞磁漂洗液和飞磁洗脱液组成；其中，

所述飞磁裂解液组成为：1-50mM Tris-HCl、1-5M盐酸胍、10-100 mM氯化钠、1-50mMEDTA缓冲液、 0.1-10% Triton-X、50-80% 异丙醇、5-10mg/mL的核酸保护肽，飞磁裂解液的pH为6.5-8.5；所述核酸保护肽的序列为：MVRSSSRTPSDKPVAHRRANALLAQLQWLNVVANPQRRANALLANGVELRDNQLVVPSEGLYLIYSGCPSTHVLKSPCQRETLTHTISRIAVSYQTKQVLFKGQLTHTIVNLLSAIWYEPIYLSRIAVSYQTKYFGIIALDFAESGQVAKPWYEPIYLAKPWYEPIYLPEGAEAKPWYEPIYLINRPDYLGGVFQLEKGDRLSAE；

所述磁珠悬浮液组成为：体积分数为70-80％的超顺磁微球，所述超顺磁微球的粒径介于10～50nm，磁珠悬浮液pH5.0-6.0；

所述飞磁漂洗液组成为：pH为6.0-8.0的1-50 mM Tris-HCl，10-100mM氯化钠，1-10 mMEDTA缓冲液，50-80％无水乙醇；

所述飞磁洗脱液组成为：pH为6.0-8.0的1-10mM Tris-HCl。

2.根据权利要求1所述的提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液组成为：50mM Tris-HCl、3 M盐酸胍、100 mM氯化钠、20mM EDTA缓冲液、 0.5% Triton X-100、50% 异丙醇、8mg/mL的核酸保护肽，裂解液的pH为7.0。

3. 根据权利要求1所述的提取试剂盒，其特征在于，所述磁珠悬浮液组成为：体积分数为70％的磁球，磁珠粒径介于10～50nm， 30%的无核酸酶水，磁珠悬浮液pH5.0。

4. 根据权利要求1所述的提取试剂盒，其特征在于，所述飞磁漂洗液的组成为：20mMTris-HCl、10mM氯化钠，2mM EDTA，80％乙醇。

5.一种使用权利要求1-4任一项所述试剂盒从鼻咽拭子样本中提取病毒核酸的方法，所述方法包括如下步骤：

（1）样本准备：取采样鼻咽拭子样本浸泡于生理盐水中，充分震荡混匀后，静置2-5min，然后800-12,000rpm离心，制成病毒样本保存液，取200-400μL病毒样本保存液用于检测；

（2）样本裂解：向步骤（1）用于检测样本中加入1-2倍体积的飞磁裂解液，震荡混匀后离心，得样品裂解液；

（3）核酸吸附：向步骤（2）所述样品裂解液中加入10-50 μL磁珠悬浮液，混匀后置于磁力架上，静置，待磁珠完全吸附后用弃去液体，得吸附后磁珠；

（4）漂洗：向步骤（3）所得磁珠中加入300-600 μL飞磁漂洗液，震荡混匀后置于磁力架上，静置至磁珠完全吸附后，弃去所有液体，保证无液体残留；

（5）样本洗脱：向步骤（4）所得漂洗后磁珠中加入40-100 μL飞磁洗脱液，震荡混匀后置于磁力架上，待磁珠吸附后，收集洗脱液即为所得的核酸溶液，置于-80℃保存。

6.权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）为：取采样鼻咽拭子样本浸泡于500μL生理盐水中，充分震荡混匀后，静置2-5min，然后800-12,000rpm离心，制成病毒样本保存液，取200-400μL病毒样本保存液用于检测。

7.权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）为：向步骤（1）用于检测样本中加入1-2倍体积的飞磁裂解液，漩涡震荡3-8秒后离心，得样品裂解液。

8. 权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）为：向步骤（2）所述样品裂解液中加入10-50 μL磁珠悬浮液，漩涡震荡3-8秒后，室温下在恒温混匀仪上800-1200rpm混匀2-5min，混匀后置于磁力架上，静置1-2min，待磁珠完全吸附后用弃去液体，得吸附后磁珠。