[发明专利]一种连续酶解制备碎米荠硒多肽的方法和碎米荠硒多肽

权利要求书

1.一种连续酶解制备碎米荠硒多肽的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)碎米荠蛋白粉的制备：

将粉碎后的碎米荠以去离子水进行第一提取，再经离心得到第一提取液和第一沉淀物；

将第一沉淀物以NaOH溶液进行第二提取，离心，得到第二提取液；

将第一提取液和第二提取液合并得到碎米荠蛋白液；

向碎米荠蛋白液中加入中性盐至饱和度≥60％，盐析后进行离心，将离心后所得沉淀以去离子水复溶，然后于透析袋中进行透析，再将透析液冷冻干燥后得到碎米荠蛋白粉；

(2)固定化酶的构建：

将四氧化三铁纳米颗粒与单宁酸Tris-HCI缓冲溶液和聚乙烯亚胺Tris-HCI缓冲溶液的混合溶液混合后搅拌，得到带有固定涂层的基质；

将带有固定涂层的基质与蛋白酶缓冲溶液混合搅拌，得到固定化蛋白酶；

所述蛋白酶缓冲溶液为碱性蛋白酶的硼酸盐缓冲溶液；

(3)预酶解：

将步骤(1)所得碎米荠蛋白粉溶于去离子水中，得到碎米荠蛋白液，将碎米荠蛋白液加入至酶膜反应器的酶解罐中，并加入步骤(2)所得固定化蛋白酶，在搅拌下进行酶解反应，得到碎米荠硒多肽初产物；

(4)超滤、补料：

控制酶膜反应器超滤的操作压力，对碎米荠硒多肽初产物进行酶解-膜分离耦合反应，得到透过液和截留液；

截留液回到酶解罐中继续反应；反应过程中，通过向酶解罐中加入碎米荠蛋白液以保持底物体积恒定，同时加入碱性调节剂维持体系pH为10±0.2；

(5)浓缩、干燥：

将所述透过液经旋转蒸发进行浓缩处理，得到碎米荠硒多肽浓缩液；

将所述浓缩液经高压喷雾干燥或低温冷冻干燥处理后，得到碎米荠硒多肽粉。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中，

粉碎后的碎米荠与去离子水的料液比为1g：(35-45)mL，第一提取的时间为6-10h；

第一沉淀物与NaOH溶液的料液比为1g：(35-45)mL，第二提取的时间为6-10h。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，

所述中性盐为硫酸铵；

所述透析袋为3500Da透析袋。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(2)中，

所述单宁酸Tris-HCI缓冲溶液中单宁酸的浓度为0.5～10g/L；

所述聚乙烯亚胺Tris-HCI缓冲溶液中聚乙烯亚胺的浓度为2～10g/L；

所述单宁酸Tris-HCI缓冲溶液和所述聚乙烯亚胺Tris-HCI缓冲溶液的体积比为(0.12～8)：1。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(2)中，

所述四氧化三铁纳米颗粒的粒径为200～300nm；

硼酸盐缓冲溶液中碱性蛋白酶的浓度为0.1～2g/L；

所述硼酸盐缓冲溶液的pH为9.0～11.0。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(2)中，

带有固定涂层的基质与蛋白酶缓冲溶液混合搅拌的温度为25℃～65℃，时间为2～12h，混合搅拌的速率为100～300rpm/min。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(3)中，

将碎米荠蛋白液加入至酶膜反应器的酶解罐后，还包括：调节体系pH至7～12，并将温度加热至30～60℃；

所述酶解反应的时间为1～3h。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(3)中，

所述碎米荠蛋白液中碎米荠蛋白粉的浓度为1.5-2.5g/L；

相对于1g碎米荠蛋白粉，按加酶量1700～9700U/g将步骤(2)所得固定化蛋白酶加入至所述碎米荠蛋白液中。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(4)中，

所述超滤膜的操作压力为0.05MPa～0.10MPa；

所述酶解-膜分离耦合反应体系中反应物的平均停留时间为3～6h。

10.权利要求1-9中任意一项所述的方法制备得到的碎米荠硒多肽。