[发明专利]一种利用碳氮分析仪快速测定森林土壤中微生物生物量氮的方法

权利要求书

1.一种利用碳氮分析仪快速测定森林土壤中微生物生物量氮的方法，其特征在于：该方法按照以下步骤进行：

一、取样：采集土壤样品并置于0～4℃条件下保存；

二、土壤前处理：

除去土壤样品中大于2mm的植物残体和土壤动物，然后过2mm土壤筛，调整土壤样品的湿度为田间持水量的40％；然后将土壤样品置于密封容器内进行培养；

其中，在培养过程中，在密封容器内放置有盛有氢氧化钠溶液的敞口容器用以吸收培养期间释放的CO₂；

三、熏蒸：

取步骤二所得土样置于敞口容器内，将敞口容器放在真空干燥器中，同时将另一个盛有氯仿的敞口容器和盛有氢氧化钠溶液的敞口容器放置在真空干燥器中，控制真空干燥器内空气相对湿度为100％，然后对真空干燥器进行抽真空至真空度为-0.07Mpa以下，此时氯仿沸腾，4～6分钟后停止抽真空，将真空干燥器密封并置于25℃的暗室中放置24小时，然后取出盛有氯仿和氢氧化钠溶液的敞口容器，然后再重复对真空干燥器抽真空至土样内氯仿完全除去，得到测试土样；

取步骤二所得土样并置于空气湿度为100％的真空干燥器中，密封后置于温度为25℃的暗室中放置24小时，得到对照土样；

四、提取：将测试土样和对照土样分别进行震荡提取，并分别过滤，得到测试土样提取液和对照土样提取液；

五、标准曲线测定：首先配置标准曲线待测液，利用碳氮分析仪对标准曲线待测液进行测定，得到标准曲线；

六、样品测定：

开机前向碳氮分析仪燃烧管内放入铂催化剂，碳氮分析仪预热后，取步骤四所得测试土样提取液和对照土样提取液，分别经过滤和酸化，然后注入至碳氮分析仪进样口进行氮含量测定，最后进行结果计算，即完成。

2.根据权利要求1所述的利用碳氮分析仪快速测定森林土壤中微生物生物量氮的方法，其特征在于：步骤二所述培养的条件为：湿度为100％，温度25℃，培养10-14天。

3.根据权利要求1所述的利用碳氮分析仪快速测定森林土壤中微生物生物量氮的方法，其特征在于：步骤四所述震荡提取时加入的试剂为0.25-0.50mol·L^-1的硫酸钾溶液，震荡速度为280-300rev·min^-1，震荡时间为30min。

4.根据权利要求1所述的利用碳氮分析仪快速测定森林土壤中微生物生物量氮的方法，其特征在于：步骤五所述配置标准曲线待测液方法为：首先配置浓度为1000mg·L^-1的TN溶液作为母液，分别量取0mL、2mL、4mL、6mL、8mL、10mL母液，用去离子水定容至100mL容量瓶中，得到0mg·L^-1、20mg·L^-1、40mg·L^-1、60mg·L^-1、80mg·L^-1和100mg·L^-1的标准曲线待测液。

5.根据权利要求1所述的利用碳氮分析仪快速测定森林土壤中微生物生物量氮的方法，其特征在于：步骤五所述对标准曲线待测液进行测定时碳氮分析仪参数设置：温度为750℃，进样体积为300-500uL，积分时间为200-300s。

6.根据权利要求1所述的利用碳氮分析仪快速测定森林土壤中微生物生物量氮的方法，其特征在于：步骤六所述碳氮分析仪预热方法为：开机后首先对去离子水进行测定，重复2～3次，测定时碳氮分析仪参数设置为：温度为750℃，进样体积为300-500uL，积分时间为200-300s。

7.根据权利要求1所述的利用碳氮分析仪快速测定森林土壤中微生物生物量氮的方法，其特征在于：步骤六所述进行氮含量测定时碳氮分析仪参数设置为：温度为750℃，进样体积为300-500uL，积分时间为200-300s。

8.根据权利要求1所述的利用碳氮分析仪快速测定森林土壤中微生物生物量氮的方法，其特征在于：步骤六所述酸化方法为：加入1mol/L的HCL溶液至提取液pH为6～8。

9.根据权利要求1所述的利用碳氮分析仪快速测定森林土壤中微生物生物量氮的方法，其特征在于：步骤六所述过滤采用的滤膜为直径0.45um为微孔滤膜。