[发明专利]一种载氧杂交蛋白负载金属配合物纳米体系的制备方法及应用

说明书

本发明公开一种载氧杂交蛋白负载金属配合物纳米体系的制备方法及应用，包括如下步骤：(1)杂交蛋白纳米体系的制备；(2)负载配合物的杂交蛋白纳米颗粒的制备。本发明公开了一种杂交蛋白负载金属配合物纳米颗粒的制备方法，旨在提供一种制备工艺简单、粒径稳定、可用于增氧协同的SDT治疗肿瘤的纳米体系。小分子配合物与血红蛋白和白蛋白通过简单自组装构建了纳米颗粒，解决了金属配合物水溶性差以及单纯血红蛋白载氧不稳定的缺点，该杂交蛋白体系可实现增氧协同下的声动力治疗。提供了杂交蛋白负载配合物纳米颗粒在载氧和声动力治疗方面的应用。在超声激发下，配合物‑杂交蛋白体系可有效载氧，同时具有声动力抗肿瘤效果。

技术领域

本发明涉及纳米医学技术领域。具体地说是一种载氧杂交蛋白负载金属配合物纳米体系的制备方法及应用。

背景技术

声动力疗法(SDT)由于其具有深度穿透治疗的能力，因此被认为很有前途的实体肿瘤的治疗技术。但是，肿瘤乏氧是肿瘤微环境的一个重要特征，尤其是实体肿瘤。SDT疗法需要将充足的氧气转化成单线态氧的特点与肿瘤严重乏氧之间存在着不可调和的矛盾，导致SDT治疗效果低下，成为SDT疗法的主要障碍之一。超声诱导氧气转化成单线态氧的SDT疗法进一步恶化了肿瘤的乏氧，进而引发严重的耐药和肿瘤复发，进而影响了治疗效果。

目前临床上采用高压氧吸入法缓解肿瘤乏氧，增加肿瘤区域氧含量。但是，输氧红细胞难以穿透血管进入到肿瘤内部，导致肿瘤部位氧改善效果不高，同时，过高浓度的氧气还会增加肺负担以及中神经系统氧中毒。此外，通过引入人工氧载体提高肿瘤部位氧含量已有应用，包括全氟碳化合物、聚血红蛋白、交联血红蛋白、血红蛋白脂质体等，但全氟碳具有一定的毒性，单纯的血红蛋白和血红蛋白脂质体载氧体系的稳定性不好，此外，目前的载氧体系制备工艺复杂，且只能载氧或同时负载有机药物小分子，负载配合物声敏剂以提高声动力疗法的简易制备方法有待开发。

发明内容

为此，本发明所要解决的肿瘤缺氧严重限制了声动力抗肿瘤的治疗效果的技术问题，提供一种载氧杂交蛋白负载金属配合物纳米体系的制备方法及应用，可以得到具有载氧功能和负载配合物的杂交蛋白纳米颗粒，提高声动力抗肿瘤的效果。利用血红蛋白载氧功能，制备了血红蛋白核白蛋白的杂交蛋白为载体负载配合物声敏剂，用于增氧协同的声动力治疗，可同时将氧气和声敏剂高效递送到肿瘤部位，提高声动力治疗效果，达到更好的抗肿瘤效果。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

一种载氧杂交蛋白负载金属配合物纳米体系的制备方法，包括如下步骤：

(1)杂交蛋白纳米体系的制备；

(2)负载配合物的杂交蛋白纳米颗粒的制备。

上述一种载氧杂交蛋白负载金属配合物纳米体系的制备方法，在步骤(1)中，将白蛋白与还原型谷胱甘肽混合，将白蛋白还原，还原后的白蛋白超滤出去多余的还原剂后，加入血红蛋白，在搅拌的状态下调整pH到8-9，加入甲醇，即得到纳米尺寸的杂交蛋白载体。

上述一种载氧杂交蛋白负载金属配合物纳米体系的制备方法，白蛋白与还原型谷胱甘肽的质量比为1:0.1-1。

上述一种载氧杂交蛋白负载金属配合物纳米体系的制备方法，白蛋白与血红蛋白的质量比为2-20：1。

上述一种载氧杂交蛋白负载金属配合物纳米体系的制备方法，采用弱碱碳酸钠调整pH。

上述一种载氧杂交蛋白负载金属配合物纳米体系的制备方法，甲醇的加入量为0-2mL。

上述一种载氧杂交蛋白负载金属配合物纳米体系的制备方法，在步骤(2)中，向步骤(1)的杂交蛋白载体加入四磺酸酞菁锰配合物的氯仿溶液，冰浴下采用间歇式超声破碎5-10分钟，然后用碳酸钠调整pH值到7.5-9，并充分震荡，即制得澄清的负载配合物的杂交纳米体系。