[发明专利]一种茎尖菜用甘薯疮痂病的抗性鉴定方法

权利要求书

1.一种茎尖菜用甘薯疮痂病的抗性鉴定方法，其特征在于，所述包括以下步骤：

S1、待鉴定甘薯材料准备：待鉴定的茎尖菜用甘薯品种或品系材料，种植于广东省农业科学院钟落潭白云基地，经性状观察，生长健康无病，扩繁后备用。

S2、病原菌准备与活化：通过收集新鲜疮痂病病样，采用组织分离法获得具有致病力的疮痂病病原菌、扩繁待用。亦可将保存在广东省农业科学院作物研究所的甘薯疮痂病菌株CJ1活化。将新分离的疮痂病病原菌或者菌株CJ1接种至PDA培养基平板，25℃黑暗条件培养，待PDA培养基平板上生长出菌丝体后，用于接种体制备。

S3、接种体的制备：将S2活化病原菌在PDA平板上扩繁，生长7d后，加入1-3mL灭菌水，用涂布棒反复涂刮菌落表面，使部分菌丝和孢子溶解于水中，将菌悬液涂布于PDA平板上，并在25℃黑暗条件下进行预培养5-7d，再将长出的菌落夹取到含有100μL去离子水的离心管中，震荡培养10h，获得分生孢子悬液并调整浓度为3×10⁴个孢子/mL，加入吐温80使其浓度为2％。

S4、病圃诱发与人工接种：将生长一致健康无病的待鉴定茎尖菜用品种(品系)种植于广东省农业科学院钟落潭白云基地病圃，小区面积5.4m²，每个小区栽插90株，每个品种设3次重复，同时种植感病对照和抗病对照品种，按照茎尖菜用甘薯品种种植常规管理，利用步骤S3、接种体的制备中获得的分生孢子液悬液，对种植在甘薯疮痂病病圃的待鉴定材料，进行人工喷雾接种，接种后每天观察，直至田间感病对照广菜薯5号完全发病后，进行抗病评价。

S5、抗病评价：采用病圃诱发结合人工喷雾方法进行抗病鉴定，直至田间感病对照广菜薯5号完全发病后，开始调查发病情况，每个重复随机选取10株进行发病严重度调查，然后计算每个待鉴定茎尖菜用甘薯材料和品种的病情指数，根据病情指数进行抗性评价；

其中，发病严重度分级标准如下：

0级:无症状；

1级:茎或叶有少数病斑，但叶片能正常展开；

2级:分枝蔓1/3左右叶片受害皱缩；

3级:分枝蔓2/3左右叶片受害皱缩；

4级:新稍畸形，嫩叶皱缩；

5级:顶芽枯死或受损，分枝蔓病斑密布、枯死或叶片变黄脱落；

根据病情分级方法计算病情指数，DI＝Σ(各级病株数×相应级数)/(调查总株数×最高级数)×100：

依据DI评价抗病性如下：

抗病R：DI≤10.5；

中抗MR：10.6≤DI≤30.5；

中感MS：30.6≤DI≤50.5；

感病S：DI≤50.6。

2.根据权利要求1所述的一种茎尖菜用甘薯疮痂病的抗性鉴定方法，其特征在于：所述步骤S1、待鉴定甘薯材料准备：待鉴定甘薯材料生长健康无病。

3.根据权利要求1所述的一种茎尖菜用甘薯疮痂病的抗性鉴定方法，其特征在于：所述步骤S2、病原菌准备与活化：通过收集新鲜的疮痂病病样，采用组织分离法获得具有致病力的疮痂病病原菌，亦可将保存在广东省农业科学院作物研究所的甘薯疮痂病菌株CJ1活化。

4.根据权利要求1所述的一种茎尖菜用甘薯疮痂病的抗性鉴定方法，其特征在于：所述步骤S3、接种体的制备：将S2活化病原菌在PDA平板上扩繁，生长7d后，加入1-3mL灭菌水，用涂布棒反复涂刮菌落表面，使部分菌丝和孢子溶解于水中，将菌悬液涂布于PDA平板上，并在25℃黑暗条件下进行预培养5-7d，再将长出的菌落夹取到含有100μL去离子水的离心管中，震荡培养10h，获得分生孢子悬液并调整浓度为3×10⁴个孢子/mL，加入吐温80使其浓度为2％。

5.根据权利要求1所述的一种茎尖菜用甘薯疮痂病的抗性鉴定方法，其特征在于，所述步骤S4、病圃诱发与人工接种：种植感病对照品种广菜薯5号，抗病对照广菜薯16-19，病圃诱发结合人工喷雾接种，直至田间感病对照广菜薯5号完全发病后，进行抗病评价。

6.根据权利要求1所述的一种茎尖菜用甘薯疮痂病的抗性鉴定方法，其特征在于，所述步骤S5抗病评价：田间中感病对照广菜薯5号完全发病后，开始调查发病情况，每个重复随机选取10株进行发病严重度调查，然后计算病情指数，根据病情指数进行抗性评价。