[发明专利]抗β-catenin蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及生物检测领域，提供了一种抗β‑catenin蛋白单克隆抗体,其重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。发明人还提供了抗β‑catenin蛋白单克隆抗体的制备方法，选取人β‑catenin氨基酸第699‑712位蛋白并与KLH偶联，作为免疫原。发明人还提供了一株分泌抗β‑catenin蛋白的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系3B1D11A8，保藏号为：CGMCC NO.19685。抗β‑catenin蛋白单克隆抗体,具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达β‑catenin蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别涉及抗β-catenin蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用。

背景技术

β-连环蛋白(β-catenin)最早于1980年由德国细胞生物学家Walt Birchmeier发现。在肿瘤细胞的侵袭与转移过程中，其中一个重要的环节就是重组细胞骨架、拆解及组装细胞间的粘附，adhesion/catenin复合体对调节细胞间粘附起主要作用，而β-catenin是该复合体的重要组成部分，对连接细胞外粘附因子、细胞骨架以及维持上皮细胞正常形态起重要作用。并且肿瘤迁移相关的蛋白如：MMP、CD44和纤连蛋白也受β-catenin/Wnt信号通路的调控。

β-catenin其编码基因CTNNBI位于染色体3p22～p21.3，全长23.2kb，包含16个外显子，启动子区富含GC，并包含TATA盒。β-catenin是一种相对分子质量为92000的多功能蛋白质，拥有独特的N端和C端，其间含有12个Armadillo(arm)重复区。β-catenin的N端包含130个氨基酸残基，富含丝氨酸和苏氨酸残基，这些残基易被磷酸化而降低β-catenin的稳定性，当编码这些残基的DNA序列发生突变或缺失时，β-catenin的稳定性增加；其C端包含100个氨基酸残基，酸性较强，含有T细胞因子(T cell factor,TCF)家族转录因子结合位点，调节下游靶基因的转录；中间为12个arm序列，每个arm序列均由42个氨基酸残基组成，12个arm共形成3个α螺旋，最后多个α螺旋相互作用进而形成右手超螺旋；N端和C端分别附着于由arm组成的短棒上，从而使整个β-catenin看起来如同一个哑铃。这种结构在其与钙粘蛋白(cadherin)、大肠腺瘤息肉蛋白(adenomatous polyposis coli,APC)、支架蛋白(Axin)、TCF/淋巴增强因子(lymphoid enhancer factor,LEF)等结合的过程中发挥重要作用。

β-catenin作为一种多功能蛋白质，在细胞粘附以及Wnt信号通路介导的基因表达调控中均发挥着非常重要的作用。β-catenin的功能主要包括以下两方面：(1)作为粘着连接的组成部分参与细胞间粘附。细胞膜上的β-catenin可与E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)的胞浆结构域结合，形成E-cadherin/β-catenin复合物，从而介导同型细胞间的相互粘附。当β-catenin的表达上调时，细胞间的粘附作用增强，以维持细胞的正确空间定位；相反，当β-catenin的表达下调时，细胞间的粘附被破坏，更容易发生迁移和运动。(2)作为Wnt信号通路中关键的调控分子，在胚胎发育和肿瘤的发生/演进中扮演重要的角色。当Wnt蛋白与卷曲蛋白(frizzled,Fz)结合后，在低密度脂蛋白受体相关蛋白(LDL-receptor-related protein,LRP)受体的协同作用下，使胞内的蓬乱蛋白(dishevelled,Dsh或DV1)发生磷酸化，从而抑制糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)的活性，进而减少β-catenin的降解，导致β-catenin在胞浆中积累并进入细胞核与TCF/LEF结合，促进靶基因的转录。

发明内容

发明人提供了一种抗β-catenin蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。